Obtención y utilización de anticuerpos monoclonales contra pseudomonas putida portadora de ADN recombinanteclonacion y secuenciacion de un gen que determina un antigeno de superficie

Abstract

Pseudomonas putida kt2440 es una bacteria de gran interes en el campo de la degradacion, por ser hospedadora del plasmido tol pwwo que confiere la capacidad de degradar aromaticos como el tolueno y m- y p-xilenos. En el contexto del riesgo de la dispersion de adn, en este trabajo se establecio que el espectro de hospedadores del plasmido pwwo-eb62 desde pseudomonas putida estaba restringido a pseudomonas del grupo de arnr i y a algunas enterobacteriaceas. Asimismo se describio la capacidad de los plasmidos tol para retromovilizar informacion genetica de otros replicones como el cromosoma y otros plasmidos. Como herramientas de deteccion especifica de microorganismos modificados geneticamente, hospedadores de pasmido recombinantes, se han generado anticuerpos monoclonales contra pseudomonas putida kt2440. Se obtuvieron tres anticuerpos monoclonales altamente especificos de especie, que no reconocieron otras bacterias de otros taxones de eubacterias, los denominados 7.3b, 7.4d y 7.5d. El antigeno reconocido por el monoclonal 7.3b es el lps, y en concreto, el antigeno o. El antigeno reconocido por los monoclonales 7.4d y 7.5d en "western" de geles de poliacrilamida y sds fue un peptido de 40 kda. Se aislo un mutante alterado en el reconocimiento inmunologico por los monoclonales 7.4d y 7.5d. El gen que fue intersectado en este mutante se clono y secuencio, encontrandose que codifica una proteina que presento una homologia del 40% con la lipoproteina asociada apeptidoglucano de tres bacterias gram-negativas, entre ellas e. Coli. Esta proteina es un candidato para exportar antigenos foraneos a la superficie bacteriana que permitan un cambio en las propiedades antigenicas de pseudomonas putida.