Estudio del mecanismo de liberación de endoglina soluble y su relevancia en homeostasis vascular

Résumé

En mi tesis se investigan los efectos de la hipoxia y sus vías corriente abajo en la liberación de sEng en la linea celular Jar parecida a los trofoblastos. En condiciones de hipoxia, se produce un aumento de la liberación de sEng al medio de cultivo de las células JAR en paralelo a una elevada formación de especies reactivas de oxígeno (ROS). Debido a que este aumento de los niveles de ROS generalmente se asocia con la formación de oxisteroles, se probó como tratamiento el 22-(R)-hidroxicoleste rol (22-R), descrito como un ligando natural de LXR. El tratamiento de las células JAR con 22-(R) o el agonista sintético de LXR, T0901317 (T09), provocó un claro aumento de la liberación de sEng. La implicación de la via de LXR se corroboró empleand o fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) obtenidos de ratones doble KO para LXR transfectados con endoglina humana. Además, la endoglina humana exprsada en transfectantes estables sufría corte proteolítico cuando estos transfectantes se sometían a hipoxia. El tratamiento de las células JAR con T09 provoca un aumento de la expression de MMP-14 y de su actividad, así como una reducción significativa de los niveles de mARN y proteina de su inhibidor endógeno TIMP-3. La implicación de la vía MMP- 14/TIMP-3 en la liberación de sEng se confirmó utilizando siARN específico para TIMP-3, TIMP-3 recombinante y MMP-14 recombinante. Algunos péptidos relacionados con endoglina que contiene la secuencia consenso de corte para MMP-14, GL, son capaces d e bloquear la liberación de sEng en células JAR. Además, cuando se trataron ratones con T09 o 22-R se produce un aumento de los niveles plasmáticos de sEng, junto con un aumento de la presión arterial sistólica (SAP). Por otro lado, ratones que sobre -expresan MMP-14 o sEng muestran un aumento de sus valores de SAP. Finalmente, cuando se administra un peptido de endoglina que contiene el sitio de corte para MMP-14 se evita el aumento de los niveles de sEng y de la SAP dependiente de los oxisterol es en los ratones. Estos estudios proporcionan algunos datos importantes para entender la implicación de la via de LXR en la liberación de sEng y su contribución a la regulación de la homeostasis vascular.