Determinantes químicos y moleculares del/los sitio/s de unión de anestésicos locales en canales de potasio clonados de ventrículo humano (hkv 1,5)

Résumé

La presente Tesis Doctoral estudia los determinantes químicos y moleculares de la estereoselectividad de los sitios de unión de anestésicos locales en un canal de potasio clonado de ventrículo humano perteneciente a la famila Shaker (hKv1,5). Para la realización de este estudio analizamos los efectos de los enantiómeros de anestésicos locales pertenecientes al grupo de las pipecoloxilidades sobre la corriente iónica generada tras la activaciónd e canales de potasio hKv1,5. Expresados de forma estable en una línea celular de fibroblastos de ratón (Ltk). Para ello, utilizamos la configuración de célula enterea de la técnica de fijación de voltaje en parches de membrana ("patch-clamp"). Asimismo, estudiamos los efectos de los enantiómeros de la bupivacaína y de un derivado cuaternario de la misma en canales hKv1,5 nativos y condistintas mutaciones dirigidas. Los resultados obtenidos demuestran que: 1 los anestésicos locales del tipo de la pipecoloxilidida (bupivacaína, ropivacaína y mepivacaína) se unen a un recptor localizado en la cara interna del canal hKv1,5 y accesible cuando éste se encuentra en estado abiero, 2 el sustituyente enposición 1 representa un determinante crucial d ela potencia y del grado de estereoselectividad inducido por este grupo de fármacaso, 3 la estereoselectividad del bloque inducido por lso enantiómeros de la bupivacaína requiere una interacción polar conla treonina enposición 505 del canal (T505) y, al menos, dos interacciones hidrofóbicas con la leucina y la valina presentes enposiciones 508 y 512 del canal hKv1,5 (L508 y V512). Estos resultados indican que el receptor para la bupvicaína localizado en la cara interna del canal hKv1,5 está formado, al menos, por estos tres aminoácidos: T505,L508 y V512. Finalmente, los resultados de los estudios realizados conun análogo permanentemente cargado de la bupivacaína indican que, 4 los canales hKv1,5 presentan, además del receptor