Caracterizacion de las colinesterasas presentes en cerebro y músculo de dorada (Sparus aurata) y estudio de su inhibición por insecticidas organofosforados

Résumé

Las colinesterasas se han venido utilizando como biomarcadores específicos para diagnosticar la exposición de poblaciones naturales a plaguicidas organofosforados y carbamatos. Mientras que los residuos de estos compuestos en el agua y en los tejidos de los peces generalmente desaparecen al cabo de varios días, la actividad colinesterasa en éstos permanece inhibida durante varias semanas. En relación con el ambiente acuático, a pesar de que la contaminación por este tipo de sustancias concierne principalmente a ríos, estuarios y lagos, no hay que descartar la posible contaminación del medio marino. En esta tesis se ha pretendido ahondar en el conocimiento de este biomarcador en la especie marina Sparus aurata, procediendo en una primera parte a la caracterización de las enzimas presentes en cerebro, músculo y plasma, en base a la especificad de sustrato y su comportamiento frente a inhibidores específicos, clasificándose como acetilcolinesterasa (AChE) o butirilcolinesterasa (BChE); se investigó la variabilidad natural en la actividad colinesterasa basal en la especie; y se estudió su relación con la edad y con diferentes parámetros morfométricos. La segunda parte del trabajo consistió en el estudio de la sensibilidad de las enzimas a plaguicidas organofosforados de tipo fosfato (diclorvos), fosforotioato (paratión) y fosforoditioato (azinfosmetil y dimetoato), abordando el estudio de la cinética de la inhibición de la colinesterasa por los oxones activos mediante estudios in vitro. Además, se llevaron a cabo ensayos in vivo para analizar el curso temporal de los efectos anticolinesterásicos de los organofosforados objeto de estudio con el fin de conocer el perfil de recuperación de las colinesterasas presentes en los distintos tejidos tras la exposición a una dosis subletal de los mismos. Los resultados obtenidos han puesto de manifiesto que, en relación con el uso de este biomarcador en la dorada, el cerebro de esta especie tiene la ventaja de que presenta una actividad colinesterasa mucho mayor que el músculo y solo está presente actividad AChE, mientras que en músculo además de ACIIE existe una EChE con propiedades atípicas. No obstante, este último tejido es más fácil de recoger y más abundante que el anterior. Además, las características que hemos observado en la BChE muscular (mayor sensibilidad y recuperación de la actividad basal más lenta) apoyarian su utilidad como biomarcador de exposición a organofosforados en esta especie.