Caracterización bioquímica de la actividad hidrolizante de O-Hexil, O-2,5-diclorofenil fosforamidato en suero de pollo y conejo

Zusammenfassung

Los dos principales mecanismos de destoxificación de compuestos organofosforados son la hidrolisis por enzimas denominadas fosfotriesterasas o la unión covalente irreversible a carboxilesterasas. Las fosfotriesterasas habían sido detectadas principalmente en mamíferos, siendo indetectables en aves. Trabajos previos habian demostrado la existencia de una actividad fosfotriesterasa que hidrolizaba O-Hexil, O-2,5-diclorofenil fosforamidato (HDCP) en pollo y mamíferos. En este trabajo se realizó una caracterización bioquímica de la actividad hidrolizante de HDCP (HDCPASA) de suero de pollo y conejo. En él se estudiaron las propiedades cinéticas, de respuesta a activadores e inhibidores y se aisló e identificó la actividad HDCPASA por técnicas cromatografías. Sorprendentemente, la purificación hasta aparente homogeneidad de la actividad HDCPASA de suero de pollo permitió atribuir esta actividad a la albumina de suero. La actividad HDCPASA copurificó con la actividad hidrolizante de P-nitrofenilbutirato (P-NPBASA). Las albúminas purificadas de suero humano, conejo y bovino y albúmina recombinante de suero humano también presentaron ambas actividades HDCPASA y P-NPBASA no resultaron afectadas por EDTA y fueron inhibidas por ácidos grasos de cadena corta. El sustrato de la HDCPASA inhibió la actividad P-NPBASA y viceversa. Estos resultados sugirieron que ambos sustratos son hidrolizados por el mismo centro activo y que este centro activo podría ser el centro de unión de ácidos grasos a la albumina. El suero de conejo presento dos actividades HDCPASA. Una de ellas sensible y otra resistente a EDTA. La actividad HDCPASA resistente a EDTA fue purificada hasta aparente homogeneidad y copurificó con la paraoxonasa resistente al mismo agente quelante y con albumina. Esta fracción no presento estereoespecifidad en la hidrólisis del HDCP. La fracción de actividad HDCPASA sensible a EDTA se asoció (junto con la paraoxanasa sensible a EDTA) …