Caracterización funcional del transportador abci3 de leishmania major

Abstract

En el presente trabajo hemos realizado la caracterización funcional de ABCI3 de Leishmania major. Para determinar la relevancia de este transportador en procesos biológicos esenciales para el parásito L. major, decidimos determinar su localización celular, además de estudiar su implicación en la resistencia a fármacos leishmanicidas y en la infectividad en macrófagos peritoneales de ratón. Al igual que el resto de los integrantes de la subfamilia ABCI, el transportador ABCI3 es un hemitransportador, constituido por un dominio transmembrana y un dominio de unión a nucleótidos que posee los motivos conservados característicos de esta familia de proteínas. Los resultados de los distintos ensayos de localización celular mostraron que el transportador se localiza mayoritariamente en la membrana mitocondrial externa, además de ubicarse parcialmente en la membrana plasmática del parásito. Para realizar la caracterización funcional del transportador utilizamos líneas de L. major que sobreexpresaban la proteína ABCI3 wild-type, o una versión mutante inactiva, ABCI3K/M. Además, obtuvimos una línea mutante nula parcial, en la que se sustituyó una copia del gen ABCI3 por un cassette de resistencia a higromicina (ABCI3+/-), y una línea complementada con una copia episomal de ABCI3, para compensar por la pérdida de función en los parásitos ABCI3+/- (ABCI3+/-::3xFABCI3pIR1SAT).