Estudios de compuestos antiulcerosos, sus metabólicos y productos de degradación por electroforesis capilar.

Resumen

El objetivo principal de esta tesis es la puesta a punto y validación de nuevos métodos analíticos de separación, caracterizados por su rapidez y fiabilidad. Buscamos alternativas a métodos conocidos con el fin de conseguir mayor rapidez en los análisis y/o mejor capacidad de resolución, a la vez que simplicidad en el tratamiento de muestra. Para ello se ha utilizado como técnica instrumental de separación, electroforesis capilar (EC), empleando como sistemas de detección la absorción UV-visible y la espectrometría de masas. Como apoyo, se emplea otra técnica analítica de separación, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), para comparación y validación de algunos de los métodos desarrollados, valorando las ventajas e inconvenientes que ambas técnicas ofrecen. Nuestro interés va dirigido al estudio de principios activos en preparados farmacéuticos, en concreto a fármacos empleados en el tratamiento de la patología ulcerosa (Inhibidores de la enzima H+/K+ ATPasa y Antagonistas de los receptores H2 de la histamina). Con ello queremos demostrar la aplicabilidad de la EC para el control de calidad de la industria farmacéutica tanto en el análisis de contenido de principio activo como de impurezas o productos de degradación. Debido a que los fármacos cuando penetran en el organismo, son transformados total o parcialmente en otras sustancias denominadas metabolitos, parte de nuestros estudios van dirigidos a la cuantificación de los correspondientes metabolitos en fluidos biológicos, en concreto en orina. A continuación se explican más detalladamente los objetivos perseguidos en nuestra investigación, constituyendo a la vez los capítulos más relevantes de la Memoria de Tesis Doctoral: 1. RESOLUCIÓN ENANTIOMÉRICA DE OMEPRAZOL Y LANSOPRAZOL (Inhibidores de la enzima H+/K+ ATPasa o bomba de protones): Puesta a punto de un nuevo método por EC para la separación y cuantificación de los enantiómeros de omeprazol. Validación del método previamente desarrollado y su aplicación a preparados farmacéuticos, comprobando el contenido enantiomérico en fármacos que se comercializan bien como mezclas racémicas o como principios activos enantioméricamente puros (esomeprazol). En la misma línea de trabajo, se llevó a cabo la separación de los enantiómeros R y S de lansoprazol, optimizando y validando un nuevo método electroforético que permite la resolución enantiomérica de la mezcla racémica del lansoprazol. La aplicabilidad de dicho método fue comprobada en fármacos que contienen como principio activo lansoprazol. 2. ESTUDIO DE LOS PRINCIPALES METABOLITOS DE OMEPRAZOL EN ORINA: Desarrollo y validación de un método por electroforesis capilar con detección UV para separación y cuantificación de omeprazol y sus principales metabolitos (5-hidroxi, sulfuro y sulfona) en orina. De forma paralela se optimizó un nuevo método por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para la determinación de dichos compuestos, con la finalidad de comparar ambos métodos. Puesta a punto de dos métodos de extracción, uno de extracción en fase sólida (SPE) y otro de extracción líquido-líquido (LLE), para el tratamiento previo de la orina, limpieza, extracción y preconcentración de los compuestos de interés. Cuantificación del 5-hidroxi-omeprazol en muestras de orina reales, aplicando los métodos de EC-UV y HPLC-UV desarrollados previamente. Estudio de la farmacocinética de este metabolito utilizando SPE y LLE respectivamente. Adaptación del método EC-UV anteriormente desarrollado, para el acoplamiento de EC con espectrometría de masas (MS), para lo cual se estudiaron los diferentes parámetros involucrados en dicho acoplamiento (flujo de líquido y gas envolvente (sheath liquid y sheath gas), voltaje del espray, temperatura del capilar. Confirmación de la presencia del 5-hidroxi-omeprazol e identificación de un nuevo compuesto 5-hidroxi-sulfuro-omeprazol en la orina mediante espectrometría de masas. 3. ESTUDIOS DE ESTABILIDAD DE OMEPRAZOL Y CARACTERIZACIÓN DE SUS PRINCIPALES PRODUCTOS DE DEGRADACIÓN: Estudio de diferentes procesos de degradación de omeprazol empleando la espectrofotometría y la EC. Para ello las soluciones de omeprazol fueron sometidas a diferentes condiciones como son exposición controlada a radiación UV, radiación visible y ausencia de luz. Separación y caracterización de los principales productos de degradación por EC usando detección UV. Este objetivo nos llevó a optimizar un nuevo método que permite la separación de omeprazol y cuatro nuevos compuestos (resultado de la degradación ocurrida por exposición controlada a radiación UV). Estudio de la influencia de la concentración de omeprazol sobre la degradación ocurrida tras la exposición controlada a radiación UV. Identificación de los compuestos mediante MS: elucidación de las nuevas estructuras mediante infusión directa y posterior separación mediante CE-MS, para lo cual se llevó a cabo la puesta a punto de un nuevo método basándonos en el desarrollado para CE-UV. 4. ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES H2 DE LA HISTAMINA: Desarrollo y validación de nuevos métodos analíticos para la separación y cuantificación de los antagonistas de los receptores H2 de la histamina (cimetidina, ranitidina, famotidina, roxatidina y nizatidina), empleando como técnica de separación la EC (con detección UV-Visible y espectrometría de masas) y HPLC (con detección UV-Visible). Previamente se pusieron a punto nuevas secuencias de extracción en fase sólida para el tratamiento de la muestra. La aplicabilidad del método fue comprobada en fármacos que contienen como principios activos alguno de los antiulcerosos antagonistas de los receptores H2 de la histamina. Con el fin de cuantificar dichos compuestos antiulcerosos en fluidos biológicos como es la orina, se desarrollaron métodos similares a los anteriores que permiten la extracción y posterior separación y cuantificación de los mismos en dicho medio. La comparación de los resultados obtenidos por EC y HPLC refuerza la precisión y robustez de los nuevos métodos optimizados y validados como alternativa a la cromatografía líquida de alta resolución.