Aspectos oxidativos en la respuesta celular de un modelo in vitro de pancreatitis aguda. Papel del hidroxitirosol y de la modificación del perfil lipídico de membrana

Resumen

Numerosos estudios epidemiológicos han mostrado que las poblaciones Mediterráneas en comparación con poblaciones del norte de Europa tienen una más baja incidencia de enfermedades crónicas con etiología oxidativa-inflamatoria, principalmente debido al tipo de dieta. Los efectos beneficiosos atribuidos a la Dieta Mediterránea, en parte, son consecuencia del alto contenido de ácidos grasos monoinsaturados (ácido oleico), compuestos fenólicos antioxidantes (hidroxitirosol) y ácidos grasos poliinsaturados omega-3 (EPA, DHA). La pancreatitis aguda es una patología de tipo oxidativa-inflamatoria de incidencia creciente en países desarrollados y que no tiene una terapia específica. De entre los distintos modelos de pancreatitis aguda, el modelo más utilizado tanto in vivo como in vitro, es el modelo de supraestimulación con ceruleína. Nuestra hipótesis postula que algunos componentes típicos de la dieta mediterránea (ácido oleico, ácidos grasos omega-3 de cadena larga e hidroxitirosol) tienen un papel modulador sobre los mecanismos celulares implicados en el desarrollo de una enfermedad oxidativo-inflamatoria como es la pancreatitis aguda. Nuestro objetivo general es estudiar los posibles cambios beneficiosos que se pueden producir a nivel celular como consecuencia de la modificación en el perfil lipídico de las membranas o de la presencia del compuesto fenólico hidroxitirosol, así como de la existencia de posibles interacciones o potenciación entre ambos factores. Describimos por primera vez un modelo de pancreatitis aguda inducida por ceruleína en la línea celular AR42J diferenciando las células hacia un fenotipo exocrino con dexametasona. La diferenciación de las células AR42J con dexametasona consigue un fenotipo celular más cercano al que presentan las células acinares de rata. Este aspecto metodológico hace que algunos resultados obtenidos por nosotros en este modelo no concuerden con los descritos por otros autores en células AR42J no diferenciadas con un fenotipo anficrino. Se describe un método para la modificación del perfil lipídico de las membranas de las células AR42J, por enriquecimiento de ellas en determinados ácidos grasos, inducido por la presencia de estos en el medio de cultivo. Estas modificaciones se asemejan a las inducidas en células acinares de rata por la ingesta habitual de distintos tipos de grasa en la dieta. Este modelo permite estudiar las repercusiones funcionales de esta modificación. En conjunto, nuestro modelo muestra un daño celular claro que se asemeja a lo descrito en otros modelos de pancreatitis aguda in vivo e in vitro con células AR42J no diferenciadas en parámetros de muerte celular y secreción neta de amilasa. No coinciden en la respuesta oxidativa, a excepción de la disminución marcada en las defensas antioxidantes no enzimáticas de la célula (GSH) y se describen, por primera vez las modificaciones inducidas por un nuevo marcador de la función celular, la F-actina, implicado en el proceso secretor de enzimas. Respecto al papel del hidroxitirosol un compuesto fenólico presente en cantidades importantes en la fracción insaponificable del aceite de oliva virgen, tanto en células sin o con modificación del perfil lipídico de las membranas y con o sin la presencia de daño por ceruleína, el HT presenta efectos pleiotropicos, comportándose como antioxidante, pro-oxidante y no afectando a las células en los diferentes supuestos experimentales. La modificación del perfil lipídico (de ácidos grasos) de membrana por la presencia de ácido oleico y de EPA/DHA en el medio de cultivo provoca en las células AR42J cambios en el estrés oxidativo, viabilidad y muerte celular, y funcionalidad celular (comportamiento de F-actina y secreción de amilasa). Comparativamente, el enriquecimiento de las membranas en ácidos grasos monoinsaturados o ácidos grasos poliinsaturados omega-3 de cadena larga, provoca comportamientos celulares diferentes.