Desarrollo de un sistema de electroforesis capilar bidimensional

Resumen

En esta Memoria se describe el trabajo realizado para el diseño, construcción y puesta a punto de un sistema de electroforesis capilar bidimensional (2D-CE). La necesidad de contar con técnicas bidimensionales de separación, y en general multidimensionales, radica en la imposibilidad que presentan las técnicas unidimensionales para resolver el gran número de componentes presentes en muestras complejas, como es por ejemplo, el caso de algunas muestras biológicas. Para conseguir un elevado poder de resolución con el uso de técnicas de separación bidimensionales, es necesario que se cumplan dos requisitos. El primero de ellos es la ortogonalidad del sistema, es decir, que los mecanismos de separación utilizados en una y otra dimensión se basen en propiedades de las moléculas lo más diferentes posibles. El segundo requisito es que la resolución conseguida en la primera dimensión no se pierda a lo largo de todo el proceso, esto es, durante la transferencia de la muestra de la primera a la segunda dimensión y durante la separación en esta última. Si se cumplen estas condiciones, la capacidad de picos de la técnica bidimensional será el producto de las capacidades de picos de cada una de sus dimensiones por separado. Actualmente los estudios electroforéticos de muestras complejas, como pueden ser las que se abordan en el campo de la proteómica, se realizan mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (2D-PAGE) debido a su elevada capacidad de picos. Sin embargo, la 2D-PAGE presenta bastantes limitaciones desde el punto de vista de la reproducibilidad y la automatización. Otras limitaciones que presenta esta técnica son el largo tiempo de análisis, la dificultad de acoplamiento en linea (on-line) a un sistema de detección por espectrometría de masas, la limitada sensibilidad que se obtiene, la imposibilidad de analizar proteínas altamente hidrófobas, la mala resolución obtenida para proteínas muy básicas o muy ácidas, y sobre tod