Células madre embrionariasaspectos ético-legislativos y desarrollo de una nueva metodología para la derivación de líneas celulares embrionarias (escs)

Resumen

La obtención de las primeras líneas de células madre embrionarias murinas (mESCs) en 1981 abrió un campo sin precedentes en la biomedicina. En 1998 se derivaron las primeras células madre embrionarias humanas (hESCs a partir de embriones sobrantes de procesos de fecundación in vitro (IVF). Las ESCs se han convertido en un campo de investigación biomédica emergente con grandes expectativas en embriología , modelos de enfermedad, screeening de fármacos y tóxicos, oncología y terapia celular y medicina regenerativa. Desde el punto de vista ético-legal, la derivación de las hESCs tiene que estar muy regulada legislativamente, debido a las controversias legislativas que se presentan durante el proceso. En España, actualmente, existen dos leyes que regulan la investigación con células madre para la derivación de hESCs, la Ley sobre Técnicas de Reproducción Asistida, y la Ley de Investigación biomédica. El punto más importante de estas leyes es la firma de un consentimiento informado por parte de los progenitores, donde indican el destino final que quieren para sus embriones congelados sobrantes de un ciclo de IVF, entre el que se encuentra la investigación con células madre. Además, existe una Directiva Europea que regula la manipulación de células humanas en todos los países de la Unión Europea. Desde el punto de vista experimental, los métodos actuales de derivación de hESCs son subóptimos, siendo la tasa de derivación muy baja, necesitándose un número alto de embriones para derivar pocas hESCs. Esto explica la necesidad de desarrollar nuevos métodos más eficaces para derivar nuevas líneas de hESCs. En base a estos antecedentes, los objetivos principales han sido: Objetivo 1: Analizar la predisposición de las parejas andaluzas que se realizaron un ciclo de IVF en dos hospitales públicos de Andalucía a donar sus embriones a investigación, mediante la realización d euna entrevista personal, y comparar los resultados obtenidos con los que se presentaron en Estados Unidos. Objetivo 2: Estudiar las controversias legales encontradas en la barrera entre la medicina reproductiva y la investigación con hESCs. Objetivo 3: Estudiar si la combinación del método de cultivo directo de los blastocistos con la tecnología láser mejora la eficiencia en la derivación de hESCs, utilizando tanto un modelo murino como humano. Objetivo 4: Analizar si el uso de células mesenquimales humanas (hMSCs), utilizadas como células alimentadoras, mejoraría la derivación de hESCs, aprovechando la capacidad de estas células de formar parénquima. Objetivo 5: Estudiar si el uso de un inhibidor de la proteína ROCK (iROCK) aumenta la supervivencia embrionaria en el caso de embriones congelados de mala calidad, al igual que lo hace con células madre embrionarias disociadas. Los resultados de esta tesis han sido: -Un 50% de las parejas andaluzas sometidas a un ciclo de IVF entrevistadas decidió donar sus embriones sobrantes a investigación. -Deben de existir distintos niveles de regulación legislativa respecto al tipo de manipulación embrionaria realizada, siendo más estricta cuando el objetivo perseguido sea la terapia celular. -La técnica combinada de cultivo directo del blastocisto junto a la técnica láser mejora la eficiencia de derivación de hESCs en modelo murino, pero no en modelo humano. -El uso de hMSCs como soporte de crecimiento mejora significativamente la eficiencia en la derivación de hESCs. -El uso de iROCK mejora la tasa de supervivencia en embriones congelados de mala calidad, pero no se ve traducido en una mejora en la tasa de derivación de hESCs. -Tres líneas de hESCs han sido derivadas en esta tesis, denominadas AND-1, -2 y -3. Las tres líneas se han caracterizado completamente, y han sido depositadas en el Banco Nacional de Líneas Celulares.