Influencia de los organofosforados y la sobreexpresión de la esterasa diana de neuropatía sobre la secreción de neurotransmisores y la citotoxicidad en cultivos primarios de células cromafines bovinas

Resumen

El objetivo principal de este trabajo fue estudiar los efectos de compuestos organofosforados sobre la secreción de neurotransmisores y sobre la viabilidad celular de cultivos primarios de células cromafines bovinas. Se diseñó y optimizó una metodología analítica basada en cromatografía líquida de alta resolución con detector de espectrometría de masas capaz de detectar y cuantificar los neurotransmisores adrenalina (A), noradrenalina (NA), dopamina (D) y 5-hidroxitriptamina (5-HT) sin tratamiento previo de la muestra. Se caracterizó la secreción basal, inducida por pulso de ion potasio y el contenido intracelular de estos neurotransmisores en cultivos de diferente edad, encontrándose alteraciones relacionadas con el tiempo de vida del cultivo fundamentalmente en los niveles de A y NA, pero no de D y 5-HT. La exposición de los cultivos al organofosforado no neuropático paraoxón 40 µM durante 60 min a 37°C provocó un descenso de las secreciones basal de NA e inducida de A y NA. La exposición de las células a 75 µM del organofosforado neuropático mipafox en las mismas condiciones provocó alteraciones en las secreciones basal de A, NA y 5-HT e inducida de 5-HT, mientras que la exposición a 3 µM del también agente neuropático HDCP aumentó la secreción inducida de NA y una disminución de la secreción inducida de A y D. Por otro lado, también se ha evaluado el potencial citotóxico de dichos compuestos organofosforados mediante la técnica del MTT. Los resultados muestran ausencia de citotoxicidad tras exposición (60 minutos a 37°C) a un amplio rango de concentraciones de mipafox (0.26-10 mM) y paraoxón (0.08-1.22 mM). La CE50 para el HDCP fue 0.1 mM, por lo tanto el HDCP exhibió una mayor potencia citotóxica que el paraoxón y mipafox. Por último, se ha analizado la influencia de la sobreexpresión de la esterasa diana de neuropatía mediante infección con un adenovirus recombinante sobre la viabilidad celular, concluyéndose que este modelo celular es capaz de admitir una sobreexpresión de esta proteína de hasta el 234% sin que la viabilidad celular se muestre comprometida. En conclusión, los cultivos de células cromafines bovinas son un modelo celular apto para el estudio de efectos neurotóxicos de compuestos organofosforados.