Evaluación de la melatonina y kinureninas sintéticas sobre la actividad de la kinurenina 3-hidroxilasa en cerebro de rata

Abstract

En esta Tesis Doctoral se evalúa el efecto inhibidor y por tanto neuroprotector de compuestos como la melatonina y una serie de análogos sintéticos de la N-acetil-5-metoxikinurenamina, el principal metabolito endógeno de la melatonina, que incluye kinureninas, kinurenaminas y pirazolinas sobre la actividad de la kinurenina 3-hidroxilasa in vitro. Para ello, se obtuvieron los cerebros de ratas normales, que fueron homogenizados, alicuotados y congelados a -80ºC. En el día del experimetno, se descongela una alícuota de dicho homogenizado, que se utiliza para evaluar in vitro la potencia inhibidora de dichos compuestos sobre la actividad de la kinurenina 3-hidroxilasa. Los resultados obtenidos demuestras que la melatonina, kinurenaminas y pirazolinas no tienen efecto sobre la actividad de dicho enzima y por tanto se descarta este hecho como un mecanismo de neuroprotección de estos compuestos. Como comprobamos en estudios previos, esos resultados indican que dichos compuestos ejercen su actividad neuroprotectora a través de la inhibición de la nNOS solamente. En el grupo de las Kinureninas se obtuvieron dos compuestos, indicados como 17a y 18d, que ejercen una inhibición del 40% sobre la actividad de la kinurenina 3-hidroxilasa. Son compuestos que presentan una inhibición dosis-dependiente y los estudios cinéticos y la posterior transformación de Lineweaver-Burk demuestran que se trata de una inhibición de tipo no competitivo. Por último se realizó un estudio conformacional más potente de la enzima kinurenina 3-hidroxilasa descubierto hasta el momento. En dicho estudio se demuestra que el grupo farmacóforo es común a los tres compuestos, lo que explicaría la capacidad inhibitoria de los compuestos 17a y 18d.