Regulacion de la expresión y función de receptores de trail en celulas de cáncer de mama

Résumé

En esta tesis doctoral se han estudiado distintos aspectos de la biología de TRAIL utilizando como modelo tumoral células de cáncer de mama. Por un lado se ha caracterizado la expresión de los receptores de TRAIL y su regulación mediada por p53. TRAIL es un ligando que pertenece a la familia de ligandos de TNF-a y se une a cuatro receptores de membrana específicos denominados TRAIL-R1, -R2, -R3 y -R4, los cuales a su vez, pertenecen a la familia de receptores de TNF-a. En células de cáncer de mama se expresan tanto el ligando de TRAIL como los cuatro receptores de membrana. Tras el tratamiento de estas células con doxorrubicina, un agente genotóxico utilizado corrientemente en terapia contra el cáncer, se produce una acumulación de la proteína supresora de tumores p53 en el interior de las células. Utilizando distintas líneas celulares de cáncer de mama con diferentes estados de p53 (salvaje o mutante), y además, utlizando una de estas líneas celulares (MCF-7) establemente transfectada con la proteína E6 del virus del papiloma humano (que impide la acumulación de p53 en el interior de la célula) o establemente transfectada con una proteína p53 termosensible (la cual adquiere una conformación activa a 32ºC e inactiva a 37ºC) hemos demostrado que la expresión de los receptores TRAIL-R1, -R2 y -R3 es regulada por p53 tras la acumulación de ésta debido a un estrés genotóxico como es el tratamiento con doxorrubicina (Ruiz de Almodovar, C. et al. J Biol Chem, 2004). Además, hemos identificado, aislado y caracterizado el promotor del gen del receptor de TRAIL-R3. Este promotor contiene una secuencia típica de caja TATA. Mediante experimentos de protección por nucleasa S1 y Extensión de oligos (Primer Extension) hemos determinado el sitio de inicio de transcripción de este gen el cual se localiza a 25 nucleótidos corriente debajo de la caja TATA. A pesar de haber encontrado que el gen de TRAIL-R3 era regul