Estudio del modelo a. Tetraptera – ratón y su aplicación en el desarrollo de una formulación vacunal basada en la proteína recombinante pp2a

Résumé

Las helmintiasis afectan a más de 1.500 millones de personas en todo el mundo, causando una gran morbilidad y asociándose a importantes tasas de discapacidad. En ganadería, se estiman pérdidas de productividad de unos 1.200 millones de euros al año, a los que hay que sumar los gastos en tratamientos antiparasitarios que rondan los 1.000 millones de euros anuales. En los animales cursan con problemas gastrointestinales, causando pérdidas de peso, retraso en el crecimiento y baja reproductibilidad. En la presente Tesis Doctoral se pretendió establecer un modelo experimental para el estudio de las nematodosis que resultara técnicamente fácil y reproducible. Para ello, se han puesto a punto las condiciones óptimas de infección con el modelo experimental Aspiculuris tetraptera-ratón (CD1), que han resultado en una dosis infectante de 2 hembras grávidas y un tiempo de infección inferior a 30 días para evitar infecciones secundarias consiguiendo infecciones controladas. En este modelo se ha caracterizado la respuesta inmunitaria, tanto a nivel local como sistémico, generada en el hospedador. Se han analizado los niveles de inmunoglobulinas, el recuento leucocitario, los cambios histológicos en la mucosa de colon y los perfiles de expresión de citoquinas en órganos y tejidos inmunoactivos (bazo, nódulo linfático mesentérico y placas de Peyer). La infección controlada del ratón se acompaña de elevadas IgM e IgG específicas en suero e IgA en mucosa. Todo ello acompañado por sobreproducción de quimioquinas atrayentes de neutrófilos y macrófagos en mucosa, y una respuesta inflamatoria Th17 inicial que facilita el establecimiento del parasitismo, y que deriva en una respuesta Th9 local promovida por la IL-25 producida en respuesta a la infección. Como un primer abordaje en el estudio de la prevención de las nematodosis se ha empleado este modelo en ensayos de vacunación con la proteína recombinante PP2A, formulada con distintos adyuvantes (mucoadhesivos como carboximetilcelulosa o Plurónic, paredes bacterianas, polietilenimina y ácido oleico) y utilizando distintas vías de administración. Se seleccionaron aquellas fórmulas que mostraron los mejores valores de eficacia (tasa de protección) y seguridad (efectos adversos), así como un mayor efecto inmunomodulador protector. Con el presente trabajo hemos establecido el modelo de A. tetraptera-ratón que puede ser utilizado para futuros estudios de laboratorio. Los primeros estudios de vacunación, realizados utilizando este modelo, sugieren que la vacuna constituida por el péptido PP2Ar con carboximetilcelulosa y paredes bacterianas (FV-CMC) como coadyuvantes, es una buena candidata para ensayos de inmunización intranasal frente a nematodosis ya que proporcionó buenos niveles de protección al aumentar la rapidez y eficacia de la respuesta inmunitaria del hospedador.