Mutagénesis dirigida y caracterización energética de la interacción del factor de crecimiento para fibroblastos ácido humano con myo-inositol hexasulfato y heparina

Abstract

Se ha aplicado la tecnica de mutagenesis dirigida al gen de la forma nativa del factor de crecimiento para fibroblastos acido, fgfa, de 154 aminoacidos, obteniendose los genes mutantes fgfa97, fgfa131 y fgfa97,131, en los que se han sustituido las cisteinas, en las posiciones indicadas, por serinas. Se han iniciado estudios de caracterizacion energetica de la interaccion del fgfa con heparina y un analogo de la misma, el myo-inositol hexasulfato, basados fundamentalmente en la tecnica de calorimetria isoterma de reaccion y utilizandose dos formas nativas de la proteina, truncadas en el extremo amino-terminal, de 132 y 139 aminoacidos, fgfa-132 y fgfa-139, respectivamente. A una fuerza ionica comprendida en el rango 0.15-0.20m los parametros termodinamicos obtenidos para la reaccion de ambas formas con heparina y myo-inositol hexasulfato son muy similares. Asi, a 25c y ph 7.0, en la reaccion con heparina se obtienen valores para el cambio de entalpia en torno a -9 kcal-mol, par ala constante de equilibrio en el orden de magnitud 10 elevado a 4 m elevado a 1 y para el cambio de capacidad calorifica en el rango -150-190 cal k elevado a 1 mol elevado 1, tanto con el fgfa-132 como con el fgfa-139. En la reaccion con myo-inositol hexasulfato los valores para el cambio de entalpia se encuentran en torno a -5 kcal-mol, la constante de equilibrio en el orden de magnitud 10 elevado a 5 -10 elevado a 6 m elevado 1 y el cambio de capacidad calorifica en el rango -70-90 cal k elevado a 1 mol elevado a 1 tambien con ambas formas de la proteina. Se puede concluir, por lo tanto, que la diferente longitud de la cadena polipeptidica entre los dos fgfa no afecta a la energetica de su interaccion con los ligandos estudiados. A fuerza ionica comprendida en el intervalo 0.45-0.50 m,25 c y ph 7.0, se han determinado para el fgfa-132 en su interaccion con heparina y myo-inositol hexasulfato, unos cambios de entalpia en torno a 5 kcal/mol y -3 kcal-