Construcción de cepas de sinorhizobium meliloti altamente competitivas para la nodulacion de alfalfa (medicago sativa l.) y su liberacion en campo

Resum

El éxito de la utilizaciónd e inoculantes comerciales para mejorar el rendimiento de la coseha de leguminosas requiere que las cepas de Rhizobium utilizadas no sólo sean muy efectivas en fijación de nitrógeno, sino que también seanmuy competitivas conrespecto a las poblaciones autóctonas de rizobios preexistentes en el suelo, normalmente poco efectivas. El objetivo de este trabajo ha sio la construcciónde cepas de S. Meliloti altamente competitivas en suelos ácidos o en suelos neutros. Las cepas resultantes han sido evaluadas en experimentos de microcosmos y fianlmente se llevó a cabo la elección de la cepa más competitiva para ser estudiada en experimentos de liberación en el campo. En los experimentos de liberaciónse evaluó la persistencia y competividad de la cepa liberada así como su impacto sobre las poblaciones microbianas autóctonas. Para la construcción de cepas altamente competitivas en condiciones ácidas se estudió el efecto de los gnes nodD de la cepa LPU83 en la competitividad de S.meliloti por la nodualción de alfalfa. Por otra parte, para suelos neutros se han estudiados determianntes genéticos previamente implicados en competitividad como sonlos genes nfe, dap,y el gen putA de S.meliloti y el gen nifA de K. Pneumoniae. Al final de las evaluacionesse dicidió utilizar el gen putA para la construcción de uninoculante (M403) que fue liberado en el campo en León y en Granada. En el campo de Granada los inoculantes desaparecieron y ocupaban pocos nódulos. Sin embargo en León los inoculantes persistieron a lo largo del experimento y los valores de la ocupaciónde los nódulos fueronmejores que los de la cepa control M401. La conclusiones de esta Tesis son 1) plásmidos multicopia conteniendo el gen nifA de K. Pneumoniae no incrementan la capacidad competitiva de las cepas de S.mliloti por la nodulaciónde alfalfa; 2) los genes nfe (nodule formationeffciency) al igual que los genes implicados en al sínt