Ciclo del glioxilato en el arquea halófilo Haloferax volcaniianálisis bioquímico, filogenético y transcripcional

Résumé

Esta tesis se centra en el estudio del ciclo del glioxilato en Haloferax volcanii, un organismo halófilo del Dominio Archaea. Este es primer estudio sobre esta ruta metabolica en un organismo de este Dominio. Se detectaron altas actividades de las dos enzimas clave de esta ruta (isocitrato liasa y malato sintasa) en extractos celulares de Hf.volcanii solo cuando se uso acetato (C2)como fuente de carbono. Esto demuestra que el ciclo del glioxilato funciona en este organismo, y que existe un mecanismo de regulacion de la actividad de estas enzimas. Se demuestra por primera vez la existencia de esta ruta en un organismo del dominio Archaea. Se purificaron ambas enzimas con un grado de pureza suficiente para obtener la secuencia de aminoácidos N-terminal de ambas. Ambas enzimas poseen un marcado carácter halofílico y termofilico, sobre todo malato sintasa, con un optimo de temperatura para la actividad en el rango de 50 60 ºC y, con un 50% de la actividad maxima a 80ºC. Los genes de isocitrato liasa y malato sintasa son cotranscritos en una sola molecula de mRNA, que solo incluye estos dos genes. Este mRNA es sólo transcrito cuando Hf.volcanii crece con acetano como fuente de carbono. Estos datos demuestran que los genes de isocitrato liasa y malato sintasa estan organizados en una estructura tipo operón en el genoma de Hf.volcanii y que su transcripción esta regulada según las necesidades celulares. Se comprobó que la región anterior al gen de isocitrato liasa es un promotor, y que este es más activo cuando el acetato es la fuente de carbono.