Mecanismos de transporte y biodegradación de p-hidroxibenzoato y síntesis de metionina en pseudomonas putida dot-t1e

Resumen

La cepa Pseudomonas putida DOT-T1E presenta un enorme potencial catabólico debido a su capacidad para utilizar diversos tóxicos orgánicos como fuentes de carbono, lo cual la convierte enuna herramienta muy útil para la biodegradación de los mismos. Uno de los compuestos que pede metablizar esta cepa es el p-hidroxibenzoato, liberado al medio ambiente como producto de desecho por parte de numerosas industrias químicas y farmacéuticas, siendo muy tóxico para la mayor parte de los organismos vivos. En este trabajo, se han caracterizado tres genes relacionados con el metabolismo degradativo de p-hidroxibenzoato, que se denominaron pcaR, pcaK y pacaF. El gen pacaK se demostró que codificabauna proteína pcaK encargada del trasnporte de p-hidroxibenzoato hacia el citoplasma celulara para su degradación posterior por parte de los productos de los genes pca. El gen pcaR codificaba una proteína reguladora del ciclo de degrdación de este compuesto aromático, que se denominó ciclo del b-cetoadipato puesto que este compuesto se sintetizaba como producto intermediario de dicho ciclo. Finalmente, el producto del gen pcaF catalizaba la conversión del b-cetoadipil-CoA en intermediarios del ciclo de los ácidos tricarboxílicos, no liberándose ningún compuesto xenobiótico recalcitrante durante este proceso. Mediante la construcción de mutantes deficientes en el gen pcaK y posterior caracterización fenotípica de los mismos, pudeo demostrarse el papel fundamental del trasnportador PcaK en la incorporación de p-hidroxibenzoato a la célula, en especial a pH alcalinos, no apreciándose diferencias respecto a la estirpe silvestres cuando las células se cultivaron en medios mínimos enriquecidos consuccinato, glucosa o benzoato. Los experimentos de RT-PCR demostraron que los tres genes se transcribían independientemente unos de otros, formando tres unidades transcripcionales distintas y tres ARNm distintos. De igual modo, se comprobó