Estudio genético de halomonas eurihalina, una bacteria halófila moderada productora de un exopolisacárido de interés biotecnológico

Abstract

Halomonas eurialina es una bacteria halófila moderada frecuente en los hábitats hipersalinos, especialmente en los suelos salinos. Este microorganismo es un bacilo Gram negativo aerobio que se caracteriza por la producciónd e expolisacárido (EPS). Se encuadra dentro de la familia Halomonadaceae. Para la realización de la presente Tesis Doctoral se eligió la cepa F2-7 de Halomonas eurihalina. Dicha bacteria simetiza el EPS V2-7, polímero de interés industrial con el que se pueden preparar suspensiones acusosas de viscoidad intermideia y comportamiento pseudoplástico, que gelifican al descender el pH. El trabajo realizado ha incluido la puesta a punto de las técnicas de biología molecualr salvando siempre dos obstáculos la presencia del material extracelular viscoso y los altos requerimientos salimos del microorganismo objeto de estudio. Por otra parte, a lo largo del estudio, hemos obtenido mutantes con marcadores genéticos, que eránd e gran utilidad para llevar a cabo estudios posteriores. Hemos hecho el análisis de la organización genómica de la cepa F2-7, determinando el tamaño del cormosoma (2,500 kb) y comprobando las presencia de dos plásmidos, pVE1 y pVE2, cuyos tamaños, mapas genéticos, funcióny homología conotros plásmidos de bacterias halófilas moderadas han sido estudiadas. Por último, hemos iniciado el rastreo del genoma consondas específicas, estudios de complmentación con mutantes deficientes en exopolisacárido y análisis de las secuencias génicas mutadas por transposición. Mediante mutagénesis con el transposónmini-Tn5 se ha seleccionado el mutante S36K, de fenotipo colonial liso, afecto en el gen carB que se corresponde con la subunidad mayor del enzima carbamilfosfato sintestasa. En Halomonas eurihalina cepa F2-7 dicho enzima está codificado por dos genes carA y carB que se encuentran dispuestos de forma contigua separados por una regiónd e 57pb. Su secuencia presenta un porcentaj