El efecto de las interacciones electrostáticas en la establidad de proteínas

Zusammenfassung

Las proteinas son capaces de llevar a cabo tareas moleculares con gran velocidad y especificidad, lo que, a priori, deberia hacerlas muy utiles en un amplio abanico de aplicaciones industriales y tecnologicas. El factor fundamental que limita en muchos casos las aplicaciones tecnologicas de las proteinas es su baja estabilidad lo que ha hecho de la estabilizacion de las proteinas un objetivo muy importante en el campo de la biotecnologia. Una de las estrategias que la naturaleza utiliza para estabilizar proteinas es la optimizacion de la distribucion de cargas. Nosostros creemos que podemos emular a la naturaleza y obtener proteinas mutantes de alta estabilidad mediante el diseño racional de la distribucion superficial de cargas pero el trabajo en esta direccion exige que se aborden determinados objetivos concretos algunos de los cuales se han explorado en este trabajo: 1)Mejora de los procedimientos computacionales de prediccion. En esta tesis doctoral exploramos la posibilidad de utilizar los valores de pk determinados experimentalmente mediante resonancia magnetica nuclear para introducir en nuestros procedimientos teoricos de predicion el efecto del ambiente y de las interacciones especificas. 2)Caracterizacion de las interacciones electrostaticas en los estados desnaturalizados. Con referencia a este objetivo concreto iniciamos en esta Tesis doctoral el estudio experimental de dos sistemas que creemos pueden proporcionar informacion. A)Estudio de los fragmentos procedentes de la escision proteolitica de la tiorredoxina oxidada de E.Coli, el complejo que resulta de su asociacion y la proteina intacta. B)Estudio del desplegamiento termico del dominio de union E3 del nucleo de dihidrolipoamida succinil transferasa del complejo 2-oxoglutarato deshidrogenasa de E.Coli. 3)Caracterizacion del efecto que tienen sobre la estabilidad las interacciones electrostaticas en estados intermedos en el proceso de desnaturalizacion inducida por l