Estudio y desarrollo de alternativas analíticas de las enzimas y de su fluorescencia intrínseca o extrínseca

Resumen

En esta tesis se profundiza en el empleo de la fluorescencia de las enzimas y en su modificación química para la determinación de compuestos de interés clínico y toxicológico. Además, se logra ampliar el campo de aplicación de los métodos enzimáticos y fluorimétricos a compuestos que no son los sustratos naturales de las enzimas. Concretamente, se describe la determinación de ácido úrico, bilirrubina y colina al reaccionar con uricasa, bilirrubina oxidasa y colina oxidasa, respectivamente, mediante seguimiento de la fluorescencia de las propias enzimas. También se desarrolla la determinación de bilirrubina y colina, al reaccionar con bilirrubina oxidasa y colina oxidasa químicamente modificadas con un compuesto derivado de la fluoresceína. Por último, se describe un método para la determinación de zearalenona basado en su reacción con betaNADH en presencia de 3alfa-hidroxiesteroide deshidrogenasa, reacción que es propia de los estrógenos naturales.