Mecanismos de multirresistencia a fármacos en leishmania trópica

Résumé

El objetivo de la presente tesis doctoral ha sido la obtencion y caracterizacion de un modelo experimental de fenotipo de multirresistencia a farmacos en el protozoo parasito leishmania. Para ello se ha seleccionado in vitro una linea de leishmania tropica resistente a altas concentraciones de daunomicina que presenta un fenotipo de multirresistencia. Este fenotipo es inestable en ausencia de farmaco y se caracteriza por presentar una resistencia cruzada a farmacos no relacionados estructural ni funcionalmente con el farmaco inductor. Estudios mediante citometria de flujo demuestran que este fenotipo de resistencia esta relacionado con un significativo descenso en la acumulacion intracelular de farmaco. La linea resistente presenta amplificado un gen mdr en forma de elemento extracromosomico circular de aproximadamente 30 kb. El producto de transcripcion de este gen posee un tamaño de 12,5 kb y codifica para una glicoproteina-p detectada mediante anticuerpos pliclonales. El fenotipo de resistencia a farmacos no revierte a concentraciones subinhibitorias de los quimiosensibilizadores ciclosporina a y verapamil, requiriendose concentraciones superiores para incrementar la acumulacion de daunomicina en el interior celular. Estos quimiosensibilizadores producen a altas concentraciones un incremento en los niveles de arnm del gen mdr. Este incremento esta regulado postranscripcionalmente en el nucleo y no presenta consecuencias funcionales sobre la resistencia a daunomicina. Los estudios de cinetica rapida mediante la tecnica de "stop-flow" sobre membranas de parasitos, indican que la linea resistente es menos permeable a daunomicina que las lineas salvajes. La linea resistente presenta ademas resistencia cruzada frente a farmacos que no son sustratos de la glicoproteina-p tales como glucantime. Dicha resistencia revierte por la accion de la butionina sulfoximina, inhibidor de la sintesis de glutation. Estos resultados junto con l