Efecto de los neuropéptidos ghrelina y vip en la marcha y función motora tras la reparación del nervio ciático con neurotubos de DL -láctico-ε-caprolactona. Estudio experimental en rata

Resumen

Las lesiones del nervio periférico son frecuentes y una importante causa de incapacidad. Aunque se han publicado múltiples tratamientos desde el siglo XIX, sólo se registran resultados satisfactorios a partir del empleo de técnicas microquirúrgicas y del injerto nervioso. Presento la tesis como compendio de Publicaciones En el primer articulo “Oxidized regenerated cellulose does not prevent the formation of experimental postoperative perineural fibrosis assessed by digital analysis” del la revista Histology and Histopathology en 2010, abordamos el problema de la fibrosis intra y perineural después de la cirugía del nervio periférico . Existen en el mercado numerosas sustancias barreras para evitar dicha fibrosis, no estando contrastadas en muchas ocasiones con trabajos experimentales que demuestren su resultado clínico. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar la efectividad de una barrera de celulosa oxidada regenerada (ORC) comercializada en el mercado para reducir la adherencia y fibrosis perineural en un modelo de agresión quirúrgica del lecho muscular para inducir fibrosis en nervio ciático de rata en 40 ratas. Después de realizar una agresión al nervio ciático de ambas patas de la rata, fue envuelto en una lámina de ORC en la extremidad posterior derecha y la extremidad izquierda sirvió como control. Los animales fueron sacrificados a las 3 y 6 semanas y los nervios y la masa muscular se extrajeron en bloque. El tejido conectivo era cuantificado mediante técnicas histopatológicas convencionales y análisis de imagen automático con el programa Fibrosis HR®. No se encontraron diferencias significativas en la fibrosis inducida intra o peri-neuronal entre los nervios de control (6,88% y 8,90%, respectivamente) y los nervios tratados (6,57% y 9,90%) a las 3 semanas y tampoco a las 6 semanas(10,41% y 12,51% en los controles; 11,85% y 15,72% en los nervios tratados). Los fenómenos inflamatorios y las reacciones granulomatosas eran más frecuente en los animales tratados. Como conclusión, la ORC no mostró ninguna ventaja en la prevención de la fibrosis del nervio y podría haber interferido en la curación. En el segundo y el tercer articulo estudiamos la regeneración nerviosa, en base a criterios morfométricos, inmunohistoquímicos, de análisis digital de imagen semiautomático y su repercusión funcional en la rata, tras la reconstrucción de un defecto del nervio ciático de 1 cm con un conducto neural comercializado, con diferentes sustancias neurotroficas y células madres. El articulo “Peripheral nerve reconstruction with epsilon-caprolactone conduits seeded with vasoactive intestinal peptide gene-transfected mesenchymal stem cells in a rat model” publicado en el Journal of Neural Engineering en 2014, se estudia la reconstrucción en los nervios periféricos con conductos nerviosos implementado con péptido intestinal vasoactivo (VIP), pretendidas propiedades neuroprotectoras y neurotroficas. El nervio ciático de cada rata Wistar macho se seccionó unilateralmente, creando un defecto de 10mm y luego se reparó mediante la interposición de conductos de Dl-láctico-ε-caprolactona de 2 mm de anchura. Las ratas fueron tratadas localmente con solución salina, con VIP a través de un catéter subcutáneo, con células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (ASC) o con ASC transfectadas con un lentivirus con una construcción genética que expresa VIP. Se utilizaron como controles ratas con el nervio seccionado sin ninguna reparación. A las 12 semanas después de la cirugía, se evaluó la función y la movilidad de la extremidad midiendo el ángulo de posición del tobillo y el porcentaje de reducción de su masa muscular. También se evaluó la histopatología, inmunohistoquímica y la morfometría del fibras mielinizadas. El principal resultado fue que las ratas que recibieron una sola inyección de ASC-transfectadas con Lenti-VIP presentaron una mejoría significativa en la recuperación funcional en el ángulo de posición del tobillo (p = 0,049) y mostraron un mayor número de fibras mielinizadas en los segmentos medio (entubulado) y distal del nervio, en comparación con los otros grupos (p = 0,046). Estos hallazgos sugieren que la utilización de un sustrato celular, además de proporcionar una fuente de VIP, es un método prometedor para la mejora de la regeneración del nervio mediante conductos Dl-láctico-ε-caprolactona, con una potencial traslación clínica en las lesiones nerviosas. El tercer artículo, “Ghrelin and adipose-derived mesenchymal stromal cells improve nerve regeneration in a rat model of epsilon-caprolactone conduit reconstruction” aceptado en la revista Histology and Histopathology y pendiente de publicación, realizamos un estudio en la misma línea que el segundo artículo, pero usamos el neuropéptido Ghrelina (GHR) o células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (sin transfectar) juntos a los conductos de Dl-láctico-ε-caprolactona. Después de aplicar el mismo modelo experimental de defecto nervioso en el ciático, las ratas fueron tratadas luego localmente con solución salina, ASC, o GHR. A las 12 semanas después de la cirugía, se evaluó la función del miembro mediante la medición de ángulo de posición del tobillo y el porcentaje reducción de la masa muscular, y evaluamos la histopatología, inmunohistoquímica, ultraestructura, y morfometría de fibras mielinizadas. El principal resultado fue que las ratas que recibieron GHR o ASC no mostraron un aumento significativo en la recuperación funcional del ángulo de posición del tobillo (p = 0,372), pero se observó un incremento en el área del nervio (p = 0,015), área de mielina (p = 0,046) y el número de fibras mielinizadas (p = 0,012 ) en los segmentos medios y distales de los nervios ciáticos operados en comparación con los animales control . Estos hallazgos sugieren que la utilización de la Ghrelina o ASC pueden mejorar la regeneración del nervio usando conductos Dl-láctico-ε-caprolactona.