Construcción de un sistema de expresión heterologo con los genes de la d-carbamicasa y la d,l-hidantoinsa. Evaluación de su aplicación biotecnologia a la sintesis de d-aminoacidos a partir de derivados de la d, l-hidantoina

Resumen

El objetivo de esta tesis ha sido aislar, clonar y sobre-expresar las enzimas implicadas en la síntesis enzimática de D'-para-hidroxifenilglicina a partir de una mezcla recémica de D, L-para-hidroxifenilhidantoina.Las enzimas D, L-hidantoinasa y D-carbamilasa se han aislado del genoma de Agrobacterium sp. A244. Así mismo se han determinado las propiedades físcio-químicas de mayor interés industrial, constante de afinidad y especificidad de sustrato. Del estudio molecular realizado a la enzima D, L-hidantoinasa se deduce que el extremo amino-terminal es esencial para la actividad catalítica de la enzima. Por último se ha secuenciado el cluster en el que estan incluídos los genes de ambas enzimas, determinándose su disposición invertida respecto a una región promotora cómun. Dicha topología es compatible con la disposición de los regulones.