Análisis clínico y anatomopatológico de las variables que condicionan la supervivencia del riñón de donante en el trasplante renalpapel de la poli (adp-ribosa) polimerasa 1 (parp-1)

Resum

La poli ADP-ribosa polimerasa-1 (PARP1) es una enzima nuclear presente en todas las células eucariotas y cataliza la transferencia de unidades de NAD sobre residuos carboxílicos de glutámico y aspártico de una serie de proteínas nucleares que incluyen a histonas, DNA polimerasas, topoisomerasas, etc. Actúa regulando numerosos procesos celulares como la reparación del DNA; la diferenciación y división celular; replicación, amplificación, trasformación y expresión génica del DNA; la función mitocondrial y la muerte celular. Se activa en respuesta a daños en el ADN como consecuencia de agentes genotóxicos como la radiación ionizante, los agentes alquilantes y/o radicales libres. El conocimiento de las funciones biológicas de la PARP ha sido posible gracias al desarrollo de modelos murinos genéticamente deficientes en Parp y tratados con inhibidores del efecto de la misma. La eliminación de los genes Parp1 resulta en un beneficio frente a la isquemia cerebral , enfermedades de base inflamatoria como diabetes tipo I, shock séptico , y hemorrágico, así como procesos inflamatorios crónicos y a la lesión renal inducida por cisplatino y ligadura ureteral. La conservación en una solución con un inhibidor de la actividad de la PARP1 de corazones de rata sometidos a lesión por isquemia reperfusión ha puesto de manifiesto una mejor recuperación funcional. La coordinación sectorial de trasplantes de Granada y Jaén tiene amplia experiencia en la valoración de biopsias preimplantación en donantes con criterios expandidos. Estas biopsias constituyen un sustrato muy adecuado para la determinación de la actividad de la PARP1. El cambio en el pérfil del donante que se ha producido en España en los últimos años ha aumentado el porcentaje de este tipo de donantes sobre el total de donantes. Para poder optimizar este modelo es necesario desarrollar un modelo predictivo de selección de donantes. Esta tesis doctoral se ha configurado como un híbrido entre tesis como compendio de trabajos publicados y una segunda parte que es un estudio de cohortes diseñado para responder a interrogantes surgidos de la labor experimental previa. La primera parte está compuesta por 5 trabajos publicados entre los años 2006 y 2013. Incluye un modelo murino de lesión renal por isquemia-reperfusión y más de 800 biopsias procedentes de biopsias preimplantación de donantes con criterios expandidos; receptores con NTA, oliguria o rechazo subclínico; y biopsias protocolarias de seguimiento de trasplante. En nuestro modelo murino la expresión tubular de PARP-1 está directamente relacionada con la lesión renal por isquemia reperfusión y el desarrollo de NTA, la inhibición tanto genética como farmacológica de la actividad de PARP-1 elimina las lesiones equiparándolas al grupo control. A nivel clínico hemos reproducido estos resultados comprobando una relación directamente proporcional de la expresión de PARP-1 con el desarrollo de NTA tanto en biopsias preimplantación como en biopsias de receptores con evidencia de NTA y/o función retardada del injerto. La expresión de Parp es específica de lesiones que tiene como substrato la lesión por isquemia-reperfusión (NTA, rechazon crónico y rechazo agudo humoral) y no de otras formas de lesión como el rechazo agudo tubulointersticial y el rechazo subclínico. La expresión de PARP-1 se relaciona con el desarrollo de función retardada del injerto tanto en biopsias de receptores con oliguria y determina la función del injerto mcunado se mide en biopsias preimplantación. El periodo de isquemia no inhibe de forma completa a la PARP-1 de forma que los tiempos de isquemia fría prolongados preimplante y la conservación de injertos desechados durante 48 horas en isquemia fría aumentan el nivel de expresión de PARP. La segunda parte de esta tesis incluye a una cohorte de 120 donantes con criterios expandidos y un total de 220 injertos renales entre los años 1997 y 2010. 144 injertos (65.5%) se consideraron aptos para trasplante. El tiempo medio de seguimiento es de 6.7 años. La cohorte de pacientes con criterios expandidos presentó mayores complicaciones postrasplante: - Mayor porcentaje de NTA y FRI - Mayor estancia hospitalaria - Peores cifras de aclaramiento a la semana, al mes y al año - Menor supervivencia disminuida con respecto a los donantes <50a (HR 0.42, IC al 95% de 0.28-0.65). La lesión renal inducida por la muerte encefálica y el fallecimiento por encefalopatía postanóxica están relacionados con la expresión de PARP-1 a nivel tubular y glomerular, lo que refuerza el papel in-vivo de la PARP1 en la lesión renal por isquemia reperfusión. La expresión de PARP-1 en la biopsia preimplantación no es un factor determinante de la evolución del injerto renal en el primer año como habíamos obsrevado peviamente. Otros factores son determinantes de la evolución inmediata postrasplante como son la edad del donante y del receptor y el tratamiento con ciclosporina, Hemos desarrollado un modelo de predicción de validez renal mediante variables clínicas con un valor predictivo positivo del 80% que nos permitiría optimizar la selección de potenciales donantes con criterios expnadidos y sobretodo en el rango de edad mayor de 70 años.