Micrornas implicados en la determinación del sexo

Résumé

El desarrollo gonadal de mamíferos es un proceso altamente complejo que suscita un gran interés en la comunidad científica, ya que desajustes en éste pueden originar problemas de fertilidad o desórdenes en el desarrollo sexual. Desde el descubrimiento del gen determinante de testículo, SRY, se pensó que rápidamente se llegaría al completo entendimiento de la ruta génica que controla la determinación y diferenciación sexual. Si bien, en la actualidad se han descubierto muchos de los elementos genéticos que intervienen en esta entramada red, pero más de 20 años después del descubrimiento de SRY aún quedan muchos interrogantes, especialmente en lo referente a la regulación de estos genes. Es bien conocido el papel que juegan los microRNAs como elementos reguladores en procesos de desarrollo, proliferación celular, diferenciación, apoptosis, metabolismo y oncogénesis; por lo que es factible pensar que los microRNAs puedan intervenir también en el control del desarrollo sexual. Siendo éste el objetivo principal de esta tesis doctoral. En la actualidad existen evidencias de que los microRNAs (miRNAs) podrían regular a los genes implicados en la gonadogénesis sexual pero no existe ningún estudio que abarque el momento crítico de la determinación sexual en ratón. Para la ejecución de dicha investigación se han utilizado una amplia variedad de técnicas moleculares, citológicas, histológicas y bioinformáticas, destacando el uso de microarrays, RT-PCRs en tiempo real para miRNAs y genes codificantes de proteínas, hibridación in situ, disección de embriones, cultivos celulares, transfecciones de DNA, inmunofluorescencias, así como herramientas bioinformáticas de minería de distintas bases de datos. Los resultados de esta memoria han aportado una importante contribución al conocimiento de la genética del desarrollo gonadal en mamíferos. Así por un lado se muestran patrones de expresión específicos de sexo para diversos miRNAs en las gónadas en desarrollo indicando que estos elementos reguladores deben estar implicados en los procesos de determinación y diferenciación sexual de los mamíferos, como ya apuntaban algunas publicaciones anteriores. Sin embargo ningún estudio previo hasta ahora había mostrado a qué nivel participan los miRNAs en el control genético de estos procesos. El análisis bioinformático realizado aquí muestra cómo diversos miRNAs podrían modular la expresión de genes clave del determinismo genético del sexo, tales como SOX9 y RSPO1 y que otros como SRY podrían controlar a alguno de esos miRNAs. Además, los estudios funcionales que se han realizado han demostrado de forma experimental algunas de esas funciones. Por tanto, este trabajo ha permitido identificar y colocar algunas de las piezas clave que faltaban en el puzle de regulación génica que controla la determinación de sexo en mamíferos, demostrando así que los miRNAs no sólo participan en este proceso sino que lo hacen desempeñando papeles cruciales en el mismo.