Transportadores involucrados en la tolerancia a disolventes orgánicos en pseudomonas putida dot-t1e

Abstract

La respuesta bacteriana frente a la presencia de compuestos tóxicos en el medio ambiente es compleja. En esta Tesis Doctoral se han estudiado en detalle algunos aspectos importantes de los transportadores implicados en la respuesta a tolueno en la cepa Pseudomonas putida DOT-T1E y se han identificado nuevos mecanismos de tolerancia. Por un lado se describe la localización del operón ttgGHI, elemento clave en la expulsión del mencionado disolvente, en un plasmido al que se denominó pGRT1. Este plasmido es de gran tamaño (121 +/- 5Kb) y es autotransferible a otras cepas del género Pseudomonas, confiriendo tolerancia a tolueno a las cepas portadoras. En este trabajo también se exploró la posibilidad de intercambios funcionales entre los diferentes componentes de las bombas Ttg descritas en P. putida DOT-T1E, dando como resultado la construcción de quimeras funcionales de los transportadores ttgB y ttgE. Los resultados indicaron que algunos de los elementos de estos complejos tripartitos pueden ser intercambiables, fundamentalmente los componentes de membrana externa. Por otro lado, se ha determinado la implicación del complejo citocromo ubiquinol oxidasa (cyoABCD), y de dos transportadores (Ttg2ABCDE y Bcr) en la tolerancia a tolueno. Estos serían genes que participarían en la tolerancia como "ayuda" al mecanismo principal que sería la extrusión de tolueno por la bomba TtgGHI, permitiendo que las células de P. putida DOT-T1E respondan al choque con la mayor eficiencia posible.