Contribución al estudio de la toxicidad del bisfenol-a en zebrafish (Danio rerio)

Résumé

Ante la gran inquietud social por conocer los riesgos que conlleva la exposición al BPA en los seres humanos y la fauna en general, así como la repercusión que esta sustancia química puede tener en el medioambiente, hemos decidido realizar este estudio, intentando evaluar los efectos del BPA a corto plazo, a través de diferentes biomarcadores, en un organismo modelo animal que se encuentra en auge, como es el zebrafish. Para ello hemos utilizado 120 zebrafish (60 machos y 60 hembras) de unas 16 semanas de edad, a los cuales se les expuso durante 14 días (siguiendo las directrices de la OCDE, nº 204) a unas concentraciones de BPA disuelto en el agua de 1, 10, 100 y 1000 µg/l, además de un lote control. Tras los 14 días de exposición, los zebrafish fueron eutanasiados mediante una solución del anestésico MS-222® y bicarbonato sódico, se midieron y pesaron. De inmediato se extrajeron las gónadas de varios machos y hembras para el estudio histopatológico a través del microscopio óptico y electrónico, así como la morfometría celular. El resto de zebrafish se congelaron para el estudio toxicológico del BPA mediante una técnica LC-MS/MS, así como la determinación de la VTG mediante un kit de ELISA. Además, durante los 14 días de exposición se tomaron muestras de agua de los acuarios para analizar los niveles de BPA mediante la misma técnica utilizada para determinar los niveles de BPA en los peces. Los resultados mostraron un aspecto externo normal de los zebrafish expuestos al BPA así como en las gónadas, sin variaciones en el tamaño o en el peso corporal de los peces. Se produjo un acúmulo de BPA en los tejidos del zebrafish, que iba en aumento conforme se incrementaba la concentración de BPA a la que se exponían los peces. También observamos un aumento de la inducción de VTG en ambos sexos a medida que era mayor la concentración de BPA a la que estaban expuestos los peces, siendo muy considerable éste aumento de la inducción de VTG al exponerlos a partir de concentraciones de 100 y 1000 µg/l de de BPA. En el estudio histopatológico y morfométrico, se observaron múltiples alteraciones en las gónadas de los zebrafish. En los ovarios de las hembras se observó la vacuolización del citoplasma folicular, una gran degeneración de todos los componentes celulares y un gran aumento en el porcentaje de folículos atrésicos a partir de las concentraciones de 100 y 1000 µg/l de BPA, comprobadas mediante morfometría. En los testículos de machos expuestos a 10 µg/l de BPA, empezamos a encontrar signos de degeneración, con una hipertrofia y tumefacción de las células de Sertoli. Al exponerlos a concentraciones superiores de 100 y 1000 µg/l de BPA, el testículo presenta claros signos de degeneración, sobre todo en los expuestos a esta última, con un parénquima totalmente transformado, observando procesos hemorrágicos y de edematización, así como una hipertrofia más acentuada de las células de Sertoli confirmada mediante el estudio morfométrico de esta población celular.