Importancia de la biosíntesis del ergosterol en la proliferación celular y en el mecanismo de acción de fármacos en tripanosomátidos

Résumé

La ruta de biosíntesis de esteroles en tripanosomátidos constituye un atractivo conjunto de dianas de acción farmacológica y compuestos inhibidores de la misma han demostrado su eficacia en la interrupción del crecimiento de distintos protozoos patógenos. Uno de los principales objetivos de este trabajo ha sido la obtención de un sistema de expresión heterólogo de proteína soluble y activa para la SQS de Trypanosoma cruzi. Los resultados obtenidos en esta tesis claramente demuestran que la eliminación de aminoácidos de la regiones amino y carboxilo terminal generan proteína soluble y activa. Las Km para sus sustratos FPP y NADPH fueron de 5.25 µM y 24.47 µM respectivamente y la Vmax de 1428.56 nmol.min.mg-1. Estudios de inhibición frente a derivados de quinuclidinas y ensayos comparativos con la SQS humana nos permitieron identificar varias quinuclidinas selectivas y muy potentes con valores de Ki del orden nM frente a la SQS de T. cruzi. Por otro lado se ha estudiado el papel de la enzima 24-esterol metiltransferasa de Trypanosoma brucei y el mecanismo de acción de los azasteroles. Se sintetizaron un grupo de azasteroles que resultaron poseer una potente actividad, del orden de nM, in vitro frente a cultivos de las formas sanguíneas de T. b. rhodesiense. Sin embargo, pudimos determinar que estos azasteroles no eran activos frente a la enzima recombinante 24-esterol metiltransferasa de Trypanosoma brucei. A su vez, estudios de la composición lipídica de las formas sanguíneas y procíclicas de Trypanosoma brucei revelaron que las formas sanguíneas del parásito poseen mayoritariamente esteroles de tipo colesta mientras que los procíclicos poseen esteroles de tipo ergosta. Estudios de northen y western blot afirmaron la presencia de la enzima en ambas formas del parásito. Concluimos que en la cititoxicidad de los azasteroles sintetizados están implicados procesos moleculares adicionales a la inhibición de la 24-esterol metiltransferasa de T