Tipaje de hla clase ii mediante amplificación génica e hibridación con oligonucleótidos

Resumen

Las moleculas hla clase ii tienen como funcion presentar antigenos a las celulas inmunocompetentes para iniciar una respuesta inmunologica frente a ellos. Al ser moleculas muy polimorficas es necesario caracterizar la composicion alelica de los individuos a la hora de buscar compatibilidades en programas de trasplante y estudio de asociaciones hla-enfermedad, hoy por hoy las aplicaciones mas importantes del tipaje hla. Para ello se han empleado metodos clasicos tales como la serologia y cultivos mixtos linfocitarios. Recientemente se han puesto en marcha tecnicas de biologia molecular, empleadas en este trabajo. Sobre un grupo de 38 individuos se ha realizado una reaccion en cadena de polimerasa para amplificar las zonas genomicas codificantes de las areas mas polimorficas de las moleculas hla, y posteriormente hibridarios con paneles locusespecificos de oligonucleotidos especificos de secuencia, deducidos a partir de las zonas de mayor variabilidad alelica. Se han aplicados dos tecnicas diferentes de hibridacion empleando tampones diferentes: tmac (cloruro de tetrametilamonio) y sspe (tampon salino-fosfato). Su objeto es valorar la eficacia del tipaje genomico frente al serologico a la hora de la aplicacion a un laboratorio asistencial hla, y estandarizar las condiciones tecnicas idoneas. Los resultados obtenidos muestran que el tipaje genomico ha sido eficaz en el tipaje hla, completando la caracterizacion de tipajes serologicos incompletos. El metodo tmac ha demostrado ser mas sensible y especifico en su alternativo sspe.