Purificación y caracterización del receptor nuclear de la melatonina en hepatocitos de rata

Abstract

El objetivo principal de esta tesis ha sido la purificación y caracterización del receptor nuclear de la melatonina en hepatocitos de rata. Para ello se aislaron los núcleos y se investigó la localización nuclear de la melatonina en hepatocitos de rata, mediante técnicas de microscopía electrónica y citometría de flujo. En segundo lugar, se purificó el receptor de la melatonina principalmente mediante cromatografía de afinidad. Finalmente, se caracterizó el receptor nuclear de la melatonina mediante técnicas de autorradiografía, electroforesis e inmunotransferencia. La identificación del receptor nuclear de la melatonina se consiguió mediante el uso de ligandos específicos para éste. Por técnicas de inmunocitoquímica y citometría de flujo se demostró la presencia de melatonina en dichos núcleos. Durante el proceso de purificación del receptor se obtuvo el máximo rendimiento tratando el homogeneizado de núcleos con 25-65% de sulfato amónico, siendo esta fracción la utilizada en cromatografía afinidad. La caracterización de las proteínas purificadas determinó la presencia de dos proteínas que se unían especificamente a la melatonina de 64 y 74 kDa respectivamente.