Construcción de cepas de pseudomonas putida portadoras de sistemas condicionales de contención biológica para la eliminación de contaminantes ambientales

Resumo

Para la utilización de microorganismos manipulados genéticamente en el medio ambiente sería deseable controlar su supervivencia en dicho hábitat. Los sistemas activos de contención biológica permiten controlar la expresión de una función letal a través de un sistema regulador que responda a señales externas del medio. En este trabajo se ha construido un sistema modelo de contención biológica asociado a la degradación de aromáticos. Para la construcción de este sistema se han utilizado dos genes de lisis diferentes: el gen gef de E. coli y el gen E del falgo PhiX174. El sistema activo de contención biológica fue funcional tanto en E. coli como en P. putida. En ambos casos, la inducción de la expresión del gen de lisis condujo a la muerte celular. En P. putida, tras la expresión del gen de lisis, se produce una disminución del número de células viables, una liberación de proteínas al medio, un eflujo de 86 RB+ y las células aparecen vacias al observarlas al microscopio electrónico de transmisión. Se realizaron también ensayos de microcosmo con las cepas construidas y en todos los casos las cepas se comportaron según su diseño.