El locus h de trypanosoma cruzicaracterización de los genes pteridina reductasa 1 y tcp17

Résumé

Se realizó la caracterización de dos genes de Trypanosoma cruzi, tcp17 y pteridina reductasa 1, contiguos al gen tcpgp2. El gen tcp17 presenta un marco de lectura de 480 pb, y codifica para una proteína de 16,5 KDa. El análisis de homologías muestra que pertenece a una familia altamente conservada en la escala evolutiva, denominada YER057c. tcp17 es un gen de copia única que se localiza en dos cromosomas de 0,9 y 1,2 Mb, y se transcribe en los tres estadíos del parásito. Sin embargo la proteína se expresa diferencialmente siendo mayoritaria su expresión en el estadío epimastigota. Los estudios de localización por inmunofluorescencia y microscopía electrónica muestran que TCP17 es una proteína con una amplia distribución por toda la célula, pero su mayor concentración se observó en membrana plasmática, aparato de Golgi y estructuras vacuolares. El gen ptr1 (pteridina reductasa 1) es también un gen de copia única, presentando sus mayores homologías con los genes ptr1 de Leishmania y T. brucei. Las proteínas para las que codifican estos genes pertenecen a la familia de las deshidrogenasas/reductasas de cadena corta, ampliamente distribuídas en la escala evolutiva, y en ptr1 están presentes todos los motivos aminoacídicos conservados descritos para esta familia. Los estudios de expresión de PTR1 muestran que esta proteína también se expresa diferencialmente, siendo mayoritaria su expresión en el estadío epimastigota. Los estudios de transfección de este gen en T. cruzi muestran que su sobreexpresión confiere resistencia a los antifolatos aminopterina, trimetoprim y metotrexato, y no a pirimetamina. Para los ensayos enzimáticos la proteína se expresó en E. coli y se purificó por cromatografía de afinidad. PTR1 presentó actividad reductora dependiente de NADPH para los sustratos biopterina, dihidrobiopterina, folato y dihidrofolato, mientras que no se detectó ninguna actividad f