Estudio de procesos de plegamiento-desplegamiento de proteínas mediante calorimetría cinética

Résumé

1) Se ha demostrado mediante el estudio de un sistema modelo apropiado (plegamiento-desplegamiento de ribonucleasa a pH ácido) que, tanto la calorimetría isoterma de reacción como la calorimetría de flujo, pueden utilizarse para estudiar la cinética de plegamiento-desplegamiento de proteínas. 2) Con este propósito, resulta más conveniente, desde el punto de vista de tiempo y material, la calorimetría isoterma de reacción. 3) Se ha aplicado la calorimetría de reacción cinética a la caracterización del plegamiento-desplegamiento de lisozima de clara de huevo en concentraciones comparativamente altas de cloruro de guanidinio, lo que nos ha permitido obtener valores de entalpía de desnaturalización a esas concentraciones altas de desnaturalizante, datos que sería muy difícil obtener de otra manera. 4) El disponer de valores de entalpía de desnaturalización para lisozima a altas concentraciones de guanidina ha permitido evaluar cinéticamente la validez de los modelos de unión e intercambio, que se utilizan habitualmente para explicar el efecto de agentes desnaturalizantes sobre la estabilidad de proteínas. Se encuentra que, aun cuando ambos modelos son capaces de explicar cualitativamente los datos experimentales, desde un punto cuantitativo el acuerdo entre teoría y experimento es pobre. Se encuentra también que una simple relación lineal entre entalpía de desnaturalización y actividad de guanidina proporciona una buena descripción fenomenológica de los datos experimentales.