Evolución del sistema modulador de la fructosa-1, 6- bisfosfatasa y de la nadp-malato deshidrogenasa durante la ontogenia de plantas de guisante, y en condiciones de estres luminico y térmico

Résumé

La tiorredoxinas(Trxs) son proteínas de bajo peso molecular (alrededor de 12 Kda) de presencia ubicua. Dos Trxs cloroplastídicas han sido descritas en plantas superiores: la Trx f, involucrada en la activación de la fructosa-1,6-bisfosfatasa(FBPasa) y otras enzimas del ciclo de Calvin, y la Trx m, especializada en la modulación de la NADP-malato deshidrogenasa(NADP-MDH). Debido a su bajo potencial rédoz(entre-200 y -300 mV) y alto polimorfismo, las Trxs podrían ejercer cierto tipo de acción protectora frente a radicales libres de oxígeno generados dentro de los cloroplastos. En el presente trabajo se analizaron los niveles de expresión transcripcional (mRNA) de Trxs f y m,y de las proteínas sobre las cuales ejercen su actividad moduladora, FBPasay NADP-MDH, durante la ontogenia y en diferentes órganos de plantas de guisante, y en hojas de plantas crecidas bajo estrés lumínico y lumínico/térmico. Las Trxs f y m y sus proteínas diana, FBPasa y NADP-MDH, mostraron expresión transcripcional, analizada mediante la técnica de RT-PCR sobre mRNA total, tanto en órganos fotosintéticos como no fotosintéticos. Sin embargo, mientras la Trx m y ambas enzimas fueron pobremente expresadas en tejidos no fotosintéticos, el contenido de mRNA específico de la forma precursora de la Trx f fue alto en raíces. Por el contrario, la expresión traduccional, determinada por western-blotting, fue baja en estos órganos. Esto parece indicar la participación de la Trx f en otros procesos, además de la modulación de la FBPasa. Se encontró una elevada actividad de la FBPasa, medida en condiciones fisiológicas(pH 7,9) en granos inmaduros comparada con la presente en hojas, lo que podría estar relacionado con una elevada tasa de síntesis de almidón enlos primeros y una alto ritmo de síntesis de sacarosa en las últimas. Durante la ontogenia los mayores niveles de expresión se encontraron en floración; sin embargo las actividades enzimát