Optimización del uso de ribozimas tipo hairpin como sileciadores génicos

Resumen

La ribozima hairpin es una molécula de RNA capaz de catalizar enzimáticamtne el corte de otra molécula de RNA de una manera eficiente y específica.Estas propiedades de capacitan como herramienta molecular en la destrucciónde RNAs de interés y por tanto como un potencial agente terapéutico. El trabajo desarrollado en la tesis colabora en el desarrollo de la tecnología necesaria para el diseño y uno racional de ribozimas hairpin como silenciadores o supresores génico. En primer lugar se ha abordado la optimización de la actividad basal del motivo ctalítico tipo hirpin. Para ello se handeseñado y analizado comparatiavamente diferntes variantes con modificaciones simples de la estructura primaria y secundaria de la secuencia salvaje (WT), así como distintas comibanciones entre ellas. Del estudio cinético es posbile concluir que dos de esas moficiaciones (subtitución U39C y extensiónd e la hélice IV) comportan un efecto postivo redundando en un aumento de la eficiencia del 1,7 y 3 veces respectivamente en relación al aribozim aWT. El segundo objetivo del trabajo se ha centrado en la determinaciónd e lores requerimientos de secuencia que ha de cumplir una molécula de RNA para poder ser procesada por la ribozima. Esta informaciónresulta de vital importancia para la búsqueda teórica de sposibles dianas en el interior de RNAs. Hasta el momento, los datos dipsonibles resultaban incompletos y poco fiables., Bajo esta premisa decidimos analizr todas las posibles combinaciones de secuencia posbles para la región J2/1 del sustrato, región que concentra la mayoría de los requerimientos. LA G+1 esencial para la actividad de la ribozima se mantuvo fija, lo que arrojó un total de 64 sustratos distintos. De ellos solo 40 resultaron aptos para el procesamiento por la ribozima ahirpin. Aunque no es posible establecer un consenso genral, se ha obtenido informacióncinética detallada de la catálisis para cada variante del sustrto. A