Análisis de las alteraciones funcionales de las celulas T de pacientes con el síndrome de Wiskott-Aldrich y bases experimentales para su reconstitución mediante terapia génica

Resumen

El trabajo realizado y mostrado en la tesisi doctoral se ha centrado en el estudio del papel de la proteína WASp (Viskott-Aldrich Syndrome protein) en la transducción de señales mediadas por el complejo molecular CD3 y su implicación en los procesos de reordenación del citoesqueleto y polimerización de actina en los linfocitos T, así como el desarrollo de protocolos de transferencia génica en las células T. Las mutaciones en el gen que codifica para WASp son responsables del desarrollo de la enfermedad originando alteraciones en la síntesisi de la proteína, lo cual provoca los jprocesos patogénicos de la enfermedad que cursa con eczema, trombocitopenia e inmunodeficiencia progresiva. En primer lugar se desarrolló un sistema experimental para inmortalizar células T de enfermos de WAS y de indiviudos normales mediante infeccióncon el Herpesvirus saimiri C-488. Las células inmortalizadas retenían todas las características morfológicas así como los fenotipos de superficie y funcional de las células parentales de las que procedían, siendo destacables el defecto selectivo de proliferación en respuesta a la estimulación mediada por CD3 y la anormalidades en el citoesqueleto. El análisis de las células mediante microscopías óptica y electrónica de barrido mostró que las células T. De enfermos de WAS presentan formas aberrantes mostrando una organización de la actina del citoesqueleto anormal y una marcada polarización de la F-actina que no se observa en las células normales, a la vez que se obsevan defectos en la polmerización de actina en estímulos mediados por CD3. Además, hemos demostrado que WASp participa directamente en la transducción de señales mediadas por CD3, siendo la proteína fosforilada en residuos de tirosina de una manera dependiente de P13D. Las líneas inmortalizadas con HVS son un modelo idóneo para abordar estudios de reconstitución genética en inmunodeficiencias primarias. Si