Amplificación isotérmica de ácidos desoxirribonucleicos para análisis de alteraciones genéticas en ADN genómico

Résumé

Diversas técnicas para el diagnóstico del cáncer necesitan muestras de ADN procedentes de un reducido número de células. Estas células pueden ser extraídas del conjunto heterogéneo de células que constituyen el tumo mediante microdisección, que garantiza la homogeneidad de las células de interés. Hasta la fecha se handesasrrollado diveros métodos de amplificacióndel ADN genómico procedente de estas células de interés, ya que en caso contrario resultaría insuficente el ADN genómico original para abordar el diagnóstico. Estos métodos se fudamentan en la técnica de amplificación mediante PCR o "reacción en cadena de la polimerasa". En el desarrollo de esta tesis se muestra la optimización de un método de amplificación isotérmica como alternativa a los métodos derivados de la PCR, Este método, por su simplicidad, podría facilitar su uso en análisis diagnósticos que requiriesen un elevado número de muestras, ya que sería fácilmente automatizable. Para comprobar la homogeneidad de la reacción se realizó un análisis preliminar mediante la técnica de array-CGH, estableciendo una comparacióne ntre un ADN genómico no amplificado,y un ADN aplificado de una línea celular de cáncer de mama. Igulamente se desarrollaron microarrays de ADN complementario con los que evaluar sobre un mayor número de genes la homogeneidad de la amplificación isotérmica de ADN genómico.