Estudio termodinámico de los estados parcialmente plegados del dominio sh3 de alfa-espectrina

Résumé

Se ha estudiado la estabilidad y el plegamiento del dominio SH3 de alfa espectrina(SH3-spc) en el estado nativo mediante el método de intercambio hidrógeno-deuterio(IHD) detectado por resonancia magnética nuclear bidimensional (RMN-2D). Por otra parte se han combinado los resultados de IHD con los obtenidos mediante el estudio del desplegamiento térmico del dominio utilizando la calorimetría diferencial de barrido(CDB) junto con técnicas espectroscópicas como el dicroísmo circular (DC) y RMN. Este trabajo se ha concentrado en el estudio de IHD modificando dos variables experimentales: el Ph y la temperatura enun intervalo amplio de condiciones, desde condiciones en que estabilidad del dominio es elevada a condiciones de estabilidad marginal. Las conclusiones más importantes que se han obtenido son: - El desplegamiento térmico del dominio SH3-spc en disolución de D2o y a baja concentración de muestra se describe bien mediante el modelo de dos estados. - Las interacciones electrostáticas juegan un papel muy importante en la estabilidad del dominio con el efecto del pH. - A 27º C y a pH* muy ácido, el intercambio H/D de la mayoría de los residuos del dominio está controlado por el desplegamiento global. Sólo unos pocos residuos se encuentran implicados en algún tipo de estructura residual en el estado desplegado. - A alta temperatura, las dependencias con la temperatura de los valores de la energía de Gibbs aparente obtenidas por IHD indican de existen un estado parcialmente plegado que es termodinámicamente diferente del nativo y del desplegado. -A partir del estudio del efecto de la concentración de muestra sobre el desplegamiento térmico del dominio a pH 3.0, utilizando diferentes observables experimentales, se ha detectado un estado parcialmente plegado, probablemente dimérico cuyas propiedades termodinámicas se han caracterizado. -Se ha obtenido información estructural del estado dimérico parcial