Aislamiento, purificación y caracterización de las proteínas capaces de ligar los ácidos grasos en leishmania donovani

Résumé

En esta tesis se ha comprobado la presencia de las proteínas ligadoras de ácidos grasos (FABP) en leishmania donovani. Un tema de gran actualidad, debido a su posible uso en el diagnóstico y como vacuno contra las enfermedades causadas por parásitos. Así como la posible intervención de estas proteínas en un tratamiento selectivo dada la incapacidad de síntesis de novo de ácidos grasos por parte de estos organismos. Se ha llevado a cabo este trabajo con la forma promastigote del parásito y mediante cromatografía de afinidad se ha conseguido purificar las FABPs de Leishmania (Leish-FABP) caracterizándose mediante técnicas electroforéticas en SDS-PAGE y en IEF se determinó su peso molecular y su punto isoeléctrico (pI). Las reacciones positivas demostradas frente a varios sueros con leishmaniosis de origen humano y animal y la inexistencia de reacciones cruzadas frente a otros microorganismos intracelulares (Trypanosoma cruzi, Toxoplasmosis, Sífilis, Tuberculosis) nos induce a considerar a estas proteínas como antígenos específicos en el diagnóstico de la leishmaniosis. La creacción de anticuerpos (anti-FABP) en ratones ha permitido utilizar varias técnicas de inmunolocalización como la inmunofluorescencia y la inmunocitoquímica por las cuales se ha comprobado la amplia distribución de la proteínas en el parásito. Para determinar el fragmento inmunogénico se ha tratado la proteína con varias enzimas como proteinasaA y algunos reactivos químicos como N-Chlorosuccinamida, mostrando por lo menos dos fragmentos antigénicos. Para comprobar la capacidad de la proteína en inducir respuesta inmunitaria y estudiar el tipo de la respuesta inducida se ha estudiado en varios lotes de ratones Balb/c (infectados y previamente inmunizados, infectados y sanos) estudiándose tanto los niveles de inmunoglobulinas (IgG1, IgG2 y IgG3) como los niveles de citoquinas (IL-2, IL-4, IL-10 y IFN-gamma) comprobándose que los