Análisis molecular mediante PCR del papel que desempeñan la infección por citomegalovirus y la expresión de glicoproteína P en el fracaso del injerto renal

Abstract

Este trabajo de tesis doctoral ha pretendido abordar tanto objetivos de índoles tecnológica, referidos al desarrollo de métodos moleculares fiables de detección de la infección por citomegalovirus (CMV), así como comprobar mediante algunos objetivos clínico-patológicos la utilidad de dichos procedimientos en el control de los pacientes trasplantados, dado que, a pesar de los avances terapéuticos en la medicina antiviral en los últimos tiempos, la infección activa por CMV sigue siendo un problema de primer orden para dichos pacientes. Con este fin se plantearon como objetivos, el desarrollo y optimización, por un lado, de procedimientos de detección de ADN y ARN mensajero de CMV en secciones de tejido renal fijado en formalina tamponada e incluido en parafina, mediante PCR y RT-PCR, y por otro, el desarrollo y optimización de una metodología de detección "In Situ" de ADN viral, sobre estas mismas muestras, mediante las técnicas de hibridación y PCR "in situ". Además, y con independencia a lo anteriormente expuesto, se ha incluido un estudio específico del fenómeno MDR vinculado a la glicoproteína P, con la finalidad de comprobar si los pacientes que muestran tasas elevadas de expresión del gen MDR1, con alta incidencia de rechazo agudo y crónico del injerto, opuestamente podían mostrar una menor tasa de infección activa por CMV, al tener menores niveles de inmunosupresión. Para llevar a cabo este estudio, se procedió a la optimización de la técnica de RT-PCR para la detección de ARNm del gen MDR1 en biopsias renales postrasplante fijadas en formalina tamponada e incluidas en parafina.