Comparación de dos métodos para la cuantificación de acilcarnitinas mediante espectrometría de masas en tándem en muestras de sangre impregnadas en papel para el diagnóstico de los defectos de la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos

Resumen

El principal objetivo de los Programas de Cribado Neonatal (PCN) es la identificación de recién nacidos (RN) con enfermedades graves antes de la aparición de los síntomas y para las cuales existe un tratamiento efectivo que evitaría graves consecuencias sobre el RN. Los avances tecnológicos han permitido la implantación de la espectrometría de masas en tándem (MS/MS) en los PCN permitiendo la detección, entre otros, de los defectos de la β-oxidación de los ácidos grasos (DOAG), los cuales son errores congénitos del metabolismo (ECM) con herencia autosómica recesiva. La detección precoz de estos desórdenes se realiza mediante la cuantificación de acilcarnitinas en muestras de sangre impregnadas en papel y permite la instauración de tratamientos a edades tempranas que mejoran su pronóstico. Metodología: Se utilizan dos metodologías basadas en la MS/MS. En una de ellas se realiza la derivatización (butilación) de las acilcarnitinas extraídas del soporte papel mediante solución extractora, mientras que la otra consiste en la cuantificación de las acilcarnitinas directamente tras el proceso de extracción. Nuestro laboratorio ha utilizado ambos métodos: uno basado en la derivatización de las acilcarnitinas, utilizándose un espectrómetro de masas modelo API 3200 y otro, basado en el método sin derivatizar y en el que las mediciones se realizaron en un espectrómetro de masas modelo TQD. Resultados: La primera parte de este trabajo consiste en comprobar la validez de ambos métodos para la cuantificación de acilcarnitinas en muestras de sangre impregnadas en papel (S&S 903). Para ello se analizan muestras de papel de filtro S&S 903 sin impregnar y controles de calidad pertenecientes al Newborn Screening Quality Assurance Program del Center for Disease Control and Prevention. Se comprueba que mediante el método con derivatización se obtienen límites de detección y cuantificación más elevados, una mayor sensibilidad y una peor precisión, en comparación con el método sin derivatización. En cuanto al sesgo, el método con derivatización, en general se obtienen valores superiores al valor de referencia mientras que, cuando no se derivatiza, los resultados son inferiores, con excepción de la C0. Los coeficientes de determinación obtenidos por ambos métodos son estadísticamente iguales y superiores a 0,99. La correlación entre ambos métodos de trabajo es fuerte y se ajusta a un modelo de regresión lineal. En la segunda parte del presente estudio se han estudiado los resultados de 167.563 RN procedentes de la Región de Murcia y de la Ciudad Autónoma de Melilla cuyas muestras de sangre impregnadas en papel se recibieron entre el 09/02/2007 y el 28/01/2016. Se comprueba que todas las acilcarnitinas tienen una dependencia respecto de la edad del RN a la que las muestras fueron tomadas. En general, todas las acilcarnitinas muestran una buena estabilidad salvo C2 y C3. Asimismo, las concentraciones de la mayoría de las acilcarnitinas presentan una dependencia respecto del peso del neonato en el momento del nacimiento, así como del tipo de alimentación (materna o artificial) del RN en el momento de la toma de la muestra. Todos estos resultados son independientes del método utilizado para cuantificar las acilcarnitinas. Durante el período de estudio se detectaron a 13 pacientes con DOAG confirmados mediante estudios moleculares: 2 CUD, 4 SCADD, 3 MCADD, 1 VLCAD, 2 LCHADD y 1 MADD, rindiendo una incidencia global de 1/12.889. Conclusión: ambos métodos son igualmente válidos para ser utilizados en un PCN destinado a la detección precoz de los DOAG, presentando cada método ventajas e inconvenientes respecto al otro, los cuales tendrán que ser tenidos en cuenta por los laboratorios que las quieran implantar. La capacidad diagnóstica de ambas técnicas para la detección de ECM relacionados con los DOAG son similares