Análisis molecular, fisiológico y farmacológico del transportador concentrativo de nucleósidos cnt3

Resumen

El posible papel del transportador CNT3 en la fisiología renal no había sido descrito hasta la fecha y únicamente se había sugerido la posibilidad de que los transportadores concentrativos de nucleósidos pudieran estar implicados en el flujo vectorial de sus sustratos. La expresión del transportador tanto en el túbulo proximal, el glomérulo, así como en la parte más distal del túbulo, en concreto en el conducto colector cortical permite hipotetizar sobre la función fisiológica del transportador a nivel renal. La elevada expresión del transportador en el túbulo proximal (observada también en forma de proteína en muestras humanas) estaría en consonancia con su más que probable función en la reabsorción renal de nucleósidos así como de derivados farmacológicamente activos. El análisis de las especies moleculares resultantes del flujo transepitelial de nucleósidos a través de CNT3 permite sugerir una relación funcional entre el transportador y algunos de los enzimas del metabolismo de nucleósidos como la citidina desaminasa o la uridina fosforilasa. De este modo, la vía de entrada de los nucleósidos en las células tiene una influencia determinante en la metabolización de dichas moléculas y en su destino metabólico. La clonación del transportador hCNT3 a partir de ADNc procedente de tejido renal revelaba la existencia de un cambio no conservado de la cisteína 602 por una arginina, en el dominio transmembrana 13. La caracterización de la nueva variante demostraba que se trataba de una variante presente en población española y cuya funcionalidad se veía considerablemente reducida como resultado de una bajada de su velocidad máxima, debida a una diferente interacción de la isoforma polimórfica con los iones sodio. La clonación del transportador hCNT3 a partir de la línea celular U937 nos permitió clonar y caracterizar una nueva variante de splicing alternativo, que carecía del extremo amino terminal, cuya loralización subcelular así como su recambio se veían altamente afectadas. A partir de esta variante además conseguimos definir el papel del extremo amino terminal en la correcta inserción en membrana tanto de modelos polarizados como no polarizados.