Estudio de la proteína quinasa c frente a distintos moduladores de su actividad

Resumen

Esta tesis contribuye a nuestro conocimiento de las bases moleculares de la modulación de la PKC? por parte de la curcumina con el objeto de entender el mecanismo de acción de la curcumina y ser capaz de desarrollar nuevos fármacos a partir de compuestos curcuminoides. Por otro lado, arrojamos luz sobre los mecanismos moleculares que controlan la localización espacio-temporal y la activación de PKC? a la membrana, asi como los efectos producidos por los diferentes moduladores en este proceso. Por lo tanto, podemos concluir lo siguiente: 1) La curcumina modulas las propiedades fisicoquímicas de membranas modelos compuestas por DPPC y DEPE .La curcumina provoca un aumento del desorden a temperaturas por debajo de la temperatura de transición de dichas membranas, así como un aumento de la hidratación de los grupos carbonilos de los fosfolípidos en membranas compuestas por DPPC. En membranas modelos compuestas por DEPE favorece la curvatura negativa de las membranas, lo que puede ser responsable sus efectos sobre proteínas de membrana. 2) La curcumina aumenta la actividad de la PKC? a concentraciones menores de 20 ?M , provocando una ligera inhibición por encima de dicha concentración, pero siempre dando lugar a una mayor actividad que en ausencia de curcumina. La variación de POPS, Ca2+ y DOG presentó el mismo patrón de modulación de la actividad de la PKC?. Sin embargo, la curcumina no produjo ningún efecto en la actividad de la PKC? cuando se encontraba formando parte de micelas de Triton X-100 conteniendo distintos moduladores de la PKC?. Este hecho indica que la curcumina sólo tiene efecto sobre la PKC? cuando se encuentra incorporada a membranas.Este efefcto presentó una gran correlación con respecto a la unión de la PKC? a membranas en presencia de curcumina, lo que indica que el aumento de la actividad es debido a un aumento de la unión de la PKC? a la membrana en presencia de curcumina. 3) El dominio C2 de la PKC? provoca una segregación de la POPS en presencia de Ca2+. Sin embargo, no es capaz de provocar este tipo de segregación con respecto al PIP2. Además, produce una agregación de vesículas lamelares grandes especialmente en presencia de PIP2. Estos hechos, sugieren un proceso por el cual la unión del dominio C2 provoca segregación de sus lípidos efectores, así como la unión a través de diferentes sitios dentro del dominio, pudiendo establecer interacciones entre membranas pertenecientes a distintas vesículas. 4) La PKC? se une a la membrana en un proceso que implica dos etapas. - una primera etapa rápida debida a interacciones no específicas y en la que juega un importante papel el POPS, aunque el DOG también está implicado. El PIP2 tiene efecto principalmente en esta etapa, favoreciendo que la PKC? se mantenga en la membrana una vez que ésta se encuentra unida a la misma. - y una segunda etapa, en la que se produce interacciones estero-específicas, y en las que cada uno de los efectores implicados interaccionaría con su respectivo dominio regulador, y ocuparían su lugar de unión específico.