Caracterizacion molecular y funcional de los receptores de angiotensina ii en higado de rata

Resumen

En la presente memoria se efectúa una caracterización molecular y funcional de los sitios de unión de la angiotensina II (Ang II) en hígado y hepatocitos aislados de rata. Los resultados muestran la existencia de una única clase de sitios de unión para la Ang II en la membrana plasmática de hígado de rata. Estos lugares, sensibles al ditiotreitol y del subtipo AT1, aparecen en una heterogeneidad de formas moleculares relacionadas, probablemente, con diversos grados de glicosilación de la molécula receptora. Además, en gradiente de pH, se identifican dos complejos hormona-receptor, siendo la isoforma más básica (pI 6.8) la correspondiente a la unión específica y funcional para el agonista. En hepatocitos aislados la Ang II indujo un rápido proceso de endocitosis del complejo homonareceptor, un descenso en los niveles de cAMP inducido por forskolina, un transitorio incremento en los niveles de inositol trisfosfato (IP3), y un aumento en la movilización del Ca2+ intracelular, con una fase rápida y transitoria liberación del ion desde los lugares de almacenamiento celular, seguida de una entrada sostenida a través de canales voltaje-dependientes. El pre-tratamiento de los hepatocitos con óxido fenilarsénico, que previene el proceso de internalización del complejo hormona-receptor, no tuvo consecuencias sobre el efecto inhibidor de la Ang II sobre la formación de cAMP, reduciendo en cambio los niveles intracelulares de IP2 e IP3, así como la fase sostenida de movilización de calcio. Estos datos indican que la endocitosis del complejo hormona-receptor no es necesaria para regular la producción de cAMP, y confirman la hipótesis de que aunque la hidrólisis de fosfoinositoles se inicia en la membrana plasmática, ésta puede continuar tras la formación de vesículas endocíticas contribuyendo al mantenimiento de las señales intracelulares. Por otra parte, el tratamiento de los hepatocitos con ácido oka