Desarrollo y optimizacion de metodos de analisis y carracterizacion de peptidos y hormonas peptidicas por hplc y hplc/es-ms

Resumen

El objeto del presente trabajo ha sido el desarrollo y optimización de metodos de analisis y caracterización de péptidos y hormonas peptídicas por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y cromatografía liquida acoplada a la espectrometria de masas con fuente de ionización por electrospray (HPLC/ES-MS). Para tal finalidad, ha sido un objetivo concreto de nuestro trabajo el establecimiento de métodos de optimización, de la composición y pH de la fase móvil a utilizar, para la separación y determinación de hormonas péptidicas por HPLC, basandonos en el Método de Comparacion Solvatocrómico y en medidas correctas de pH en las mezclas hidroorganicas utilizadas como fase movil. Asimismo, la medida correcta del pH en estos medios nos ha permitido la determinación de los valores de pKa de las sustancias peptídicas estudiadas en medios hidroorgánicos, valores que pueden ser de gran ayuda a la hora de interpretar el comportamiento cromatográfico de las sustancias. Finalmente, ha constituido otro objetivo concreto de nuestro trabajo, la aplicación de los metodos de prediccion del comportamiento cromatografico de las sustancias peptídicas estudiadas a otros péptidos y hormonas peptídicas, tratando de reducir considerablemente el número de datos experimentales necesarios para establecer metodos de separacion y caracterizacion de principios activos peptidicos, tanto por HPLC-UV como por HPLC/ES-MS.