Estudios de acoplamiento de energía e inhibición en la atpasa de tipo serca

Resumen

Los objetivos planteados en esta Tesis han sido: A,- Estudiar el efecto del calcio interno, del pH y la implicación de las conformaciones de alta y baja afinidad por calcio en el acoplamiento con los sustratos UTP, pNPP y AcP. B,- El estudio de la interacción de la ATPasa con el inhibidor de alta afinidad TG. Los resultados obtenidos han sido los siguientes: 1,- La acumulación de Ca2+ libre en el interior de las vesículas favorece el desacoplamiento entre transporte e hidrólisis cuando el sustrato donador de energía es UTP. 2,- El desacoplamiento en presencia de UTP se produce a través de formas fosforialdas de la enzima estando ausente la acumulación de conformaciones con baja afinidad por Ca2+. Por tanto, en condiciones de bajo acoplamiento coexisten el ciclo E1 y el ciclo E1-E2. En condiciones de desacoplamiento total solo hay ciclo E1. 3,- El alto nivel de desacoplamiento entre transporte de Ca2+ e hidrólisis de pNPP está relacionado con la actuación predominante del ciclo de reacción E1. Un pH alcalino favorece aún más la acumulación de conformaciones enzimáticas de alta afinidad por Ca2+ y el desacoplamiento a través del ciclo E1. Un pH ácido favorece la acumulación de conformaciones de baja afinidad por Ca2+ y potencia el ciclo E2. 4,- La hidrólisis de pNPP se realiza a través del ciclo E2 cuando no hay Ca2+ o cuando hay Ca2+ pero se encuentra presente tapsigargina o una concentración elevada de dimetilsufóxido. 5,- El desacoplamiento durante la hidrólisis de AcP en las condiciones habituales de ensayo o cuando hay dimetilsulfóxido en el medio está relacionado con el ciclo E1. El aparente efecto activador de tapsigargina se relaciona con la estabilización de la conformación enzimática con baja afinidad por Ca2+. 6,- El ciclo catalítico de las ATPasas transportadoras de cationes no sigue una secuencia única de reacciones paraciales.El acoplamiento no es una propiedad intrínseca de