Diagnóstico serológico en pacientes tras infección por SARS-CoV-2. Estudio de neutralización en profesionales sanitarios tras vacunación

Résumé

Desde diciembre de 2019 el mundo ha vivido una situación sin precedentes en la historia reciente. Desde China, se propagó un virus hasta el momento desconocido. Gracias a la secuenciación de su genoma, pronto se pudo relacionar con la familia de los coronavirus y recibió el nombre de SARS-CoV-2, y la enfermedad que producía, COVID-19. Causó una pandemia con graves consecuencias para la economía y la salud en todo el mundo. Durante ese tiempo, se han destinado cuantiosos recursos, no solo al diagnóstico de la población y al tratamiento de los enfermos, sino también a recoger la mayor información posible sobre el virus para poder combatirlo. Con el fin de frenar la expansión, se ha reforzado la producción de medicamentos contra la enfermedad, personal sanitario cualificado y el desarrollo en un tiempo récord de vacunas efectivas y con tecnologías aprobadas por primera vez en la historia, como las vacunas de ARN mensajero. El objetivo de esta tesis es recoger la información más relevante sobre el SARS-CoV-2 y la COVID-19 y dar a conocer los resultados obtenidos en los estudios llevados a cabo en el Hospital Universitario Clínico San Cecilio de Granada (España) sobre la inmunidad humoral inducida por el virus. En el primer capítulo, se caracterizó la producción de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 a través de muestras de suero en 1.236 pacientes ingresados por COVID-19 y con infección por SARS-CoV-2 confirmada por RT-PCR entre abril y julio de 2020 (primera ola en España) en 18 centros de España y se determinó su producción en función de la edad y el sexo. La determinación de anticuerpos IgM + IgA e IgG se realizó por técnicas de ELISA y demostró que IgM + IgA tenían mayor reactividad que IgG al inicio de la enfermedad y hasta 16 días después, siendo estadísticamente significativa un día después del ingreso. La aparición de IgG se hizo presente a partir del séptimo día tras el resultado positivo de la PCR y continuó aumentando hasta las tres semanas, cuando IgM + IgA e IgG alcanzaron valores similares, y un mes después, cuando IgG se hizo la más prevalente. No se observaron diferencias significativas entre hombres y mujeres, pero sí se observó una mayor producción de anticuerpos al inicio de la enfermedad en pacientes menores de 75 años, aunque en las muestras siguientes, los resultados se igualaron en todos los grupos de edad. En el segundo capítulo se evaluó la capacidad in vitro de los anticuerpos generados contra la cepa salvaje del SARS-CoV-2 y las variantes B.1, B.1.1.7 y B.1.351 después de la vacunación de personal sanitario del Hospital Universitario Clínico San Cecilio de Granada (España) con BNT162b2 utilizando un ensayo de neutralización de virus completo. Para ello, se recogieron muestras de suero de 99 trabajadores de la salud (76 mujeres, 23 hombres, con una media de edad de 44 años) que recibieron dos dosis de la vacuna BNT162b2 entre enero y febrero de 2021 (tercera ola en España), de los cuales, solo 11 habían estado previamente expuestos al SARS-CoV-2. Se recogieron muestras de suero coincidentes con el día de la administración de cada dosis y 14 días después. Se utilizaron virus vivos completos de la cepa salvaje y las variantes B.1, B.1.1.7 y B.1.351 y células Vero E6. Los resultados se obtuvieron tras la observación al microscopio del efecto citopático (CPE). Tras el análisis de las muestras, se observó que el grupo de los preexpuestos demostró altos títulos de neutralización tras la primera dosis y un aumento menor tras la segunda, siendo al revés en el grupo de los no preexpuestos. En ambos grupos, la neutralización contra la variante B.1.1.7 alcanzó valores similares a los de la cepa salvaje, pero en el caso de la variante B.1.351, los títulos de neutralización fueron menores.